脆江蓠硫酸化多糖的分离、表征及其生物活性研究

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脆江蓠Gracilaria chouae是我国东南沿海常见的一种大型经济红藻,藻体肥厚多汁、质脆、易折断、富含多糖。目前,主要用于渔业养殖、琼脂提取、水质改善,亦常制成凉菜、汤液等而被食用。江蓠属多糖多为琼脂型多糖,由琼脂糖和硫琼脂组成。近年来,江蓠属多糖因具有良好的抗氧化、抗病毒等生物活性而备受关注,但关于琼脂糖与硫琼脂的理化性质和生物活性比较尚无报道,其结构信息、生物活性等亦研究较少。本研究以脆江蓠为原料,分离得到琼脂糖、脆江蓠硫琼脂和纯化的脆江蓠硫琼脂3种多糖组分,并对其进行理化性质测定和抗氧化活性评估,进而对活性较好的纯化的脆江蓠硫琼脂进行结构解析,同时以巨噬细胞为模型考察了其免疫活性。研究结果如下:首先采用热水浸提法得到脆江蓠琼脂糖(Gracilaria chouae agarose,GCA)和脆江蓠硫琼脂(Gracilaria chouae agaropectin,GCAP),GCAP经三氯乙酸脱蛋白、透析、柱层析纯化(DEAE-cellulose色谱柱及Sephadex色谱柱)等,得到均一的脆江蓠硫琼脂(purified Gracilaria chouae agaropectin,PGCAP),并对GCA、GCAP、PGCAP进行化学组成、傅里叶红外及抗氧化活性测定。结果表明,3种多糖均含有约10%糖醛酸、7%硫酸根,PGCAP的蛋白含量仅为0.11%,而GCA中3,6-内醚半乳糖含量高达52%。在1-3.5 mg/m L范围内,3种多糖均具有一定的DPPH清除能力,PGCAP超氧化自由基(O2-·)清除率最高(52%),而GCA羟基自由基(·OH)清除率最高(56%),PGCAP抗氧化能力整体上强于GCA和GCAP,而GCAP最弱。采用凝胶渗透色谱、气相色谱-质谱联用仪、核磁共振、扫描电镜、刚果红测定等进一步阐释PGCAP的结构信息,并利用巨噬细胞RAW264.7评价其免疫活性。结果表明PGCAP是分子量为11.87 k Da的硫酸化木聚糖。单糖组成分析表明PGCAP主要由木糖、半乳糖组成,其摩尔比为7.73:20.20。另外还含有少量鼠李糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖。其主链主要由→2,6)-α-L-3,6-An G-(1→,→3,4,6)-α-D-Galp-(1→,→3)-β-D-Galp2S-(1→,→3)-α-Galp-(1→组成。分支为β-Xylp-(1→,→3)-β-D-Galp2S-(1→,→3)-β-D-Galp4Ac-(1→,木糖主要位于糖残基分支末端。扫描电镜和刚果红实验表明PGCAP是一种具有是不规则的片状和棒状物交织而成的异质杂多糖,且不具有三螺旋结构。PGCAP无细胞毒性,且能促进巨噬细胞NO分泌,表明其具有免疫活性。
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