背景我们正处于科学技术高速发展的新时代,生活节奏快速提升使人们的心理压力越来越大,严重影响人们的心理健康和生活质量,这一问题已引起了广泛的社会关注。当今世界,焦虑症患者和心理相关的失眠人数与日俱增,他们都有发展为重度抑郁症患者的潜在风险,改善这群人的心理健康已成为刻不容缓的事情。慢性心理应激可以刺激下丘脑-垂体-肾上腺轴的持续活化,下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放素,使垂体释放促肾上腺皮质激素,进而增加糖皮质激素的表达与释放,而糖皮质激素能够抑制免疫细胞发挥其功能。心理应激还可以引起人体交感神经系统的兴奋,增加儿茶酚胺(包括肾上腺素和去甲肾上腺素)的释放,进而影响多种免疫细胞的调控作用。长期处在不良情绪精神和心理压力中,会对机体免疫系统产生明显干扰作用,使机体的免疫力和抗感染能力下降,加大病原体侵袭的风险,甚至影响肿瘤和自身免疫疾病的发生发展。目前国内外已有研究明确了心理应激可减少T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等多种免疫细胞的数量,影响其功能,并探索了心理应激的影响机制。但关于心理应激如何影响B细胞亚群的研究较少,对于B细胞不同亚群的影响更是鲜为报道。B细胞能够摄取、加工与提呈抗原,分化为浆细胞产生抗体并介导体液免疫应答,分泌细胞因子参与机体免疫调节。此外,B细胞能够通过识别自身抗原进行免疫反应,并且形成记忆性。相同的抗原再次感染人体时,抗原会刺激记忆B细胞分化出效应B细胞(即浆细胞),效应B细胞迅速产生大量抗体。这些抗体与抗原结合后被吞噬消化,从而消灭抗原,发挥特异免疫应答作用。探究心理应激对B细胞的影响和作用机制,能够完善心理应激的病理效应机制,有利于进一步阐释B细胞在焦虑抑郁情绪产生过程中的作用,为抑郁症患者的后续临床干预治疗提供理论依据和可行靶点。目的建立心理应激模型,探讨心理应激对B细胞以及B细胞亚群的影响。通过逆转实验,进一步探讨心理应激影响B细胞功能改变的机制,为后续临床干预治疗提供依据。方法(1)采用免疫学常用的方法建立长期和短期心理应激模型,通过行为学检测等方法确定几种模型的效果。(2)采用流式细胞术检测心理应激小鼠脾脏、骨髓、肝、肺、淋巴结器官中B细胞及其亚群变化情况。(3)采用细胞凋亡检测心理应激小鼠脾脏和骨髓B细胞各亚群凋亡情况。(4)使用糖皮质激素受体阻断剂正米非司酮(RU486),观察心理应激小鼠脾脏和骨髓B细胞及其亚群变化。(5)使用肾上腺素α受体阻断剂酚妥拉明,观察心理应激小鼠脾脏和骨髓B细胞及其亚群变化。(6)选择肾上腺素β联合受体敲除小鼠,观察心理应激后小鼠脾脏B细胞及其亚群变化实验。(7)采用流式细胞分选技术、RNA提取和Real-time PCR进行小鼠脾脏糖皮质激素受体含量测定。(8)采用Western blot检测小鼠脾脏B细胞相关信号通路。(9)采用磁珠分选和造血干细胞集落形成实验检测心理应激对小鼠造血干细胞的影响。(10)采用造血干细胞纯化技术和骨髓重建技术检测心理应激对小鼠造血干细胞影响的时间。结果(1)通过行为学等相关检测证明心理应激模型成立。(2)短期急性应激导致脾脏内B细胞总数减少,以非成熟的B细胞亚群为主,Mature B和MZB细胞亚群在B细胞中的比例升高;骨髓中B细胞总数增加,主要是Mature B细胞增加,而其他B细胞亚群都出现明显的下降。(3)短期急性束缚应激导致肝脏、淋巴结和外周血中的B细胞总数略有减少和各亚群数量下降,但Mature B细胞亚群在B细胞中的比例升高,其数目仅略有减少。而肺组织中B细胞总数显著下降,尽管Mature B细胞亚群在B细胞中的比例不变,其数目也显著下降,T1B和T2B细胞亚群数目下降更多。(4)长期束缚应激导致小鼠骨髓中B细胞总数和各亚群数量减少。(5)社会挫败应激也导致小鼠骨髓中B细胞总数和各亚群数量减少。(6)短期束缚应激的小鼠,脾脏B细胞不同亚群开始变化的时间不同。(7)短期束缚应激中,数量减少明显的B细胞亚群,其凋亡比例也高。(8)使用糖皮质激素受体阻断剂能够逆转应激造成的B细胞及其亚群的变化。(9)酚妥拉明对于心理应激所造成的B细胞减少没有逆转作用。(10)小鼠中肾上腺素β受体敲除能够部分逆转脾脏中B细胞的减少。(11)B细胞亚群变化不同可能与各亚群的糖皮质激素受体(GR)含量有关,GR含量多的亚群,其所受影响越大。(12)应激组脾脏B细胞P-AKT和P-ERK的表达量明显降低。(13)短期束缚模型中,应激组造血干中粒细胞、红系、巨核细胞的集落形成单位均减少;社会挫模型的实验结果中,应激组造血干中粒细胞、红系、巨核细胞、巨噬细胞的集落形成单位有增加的趋势。(14)短期束缚模型小鼠的骨髓在移植后造血重建过程中粒细胞、T细胞比例绝对数在一定时间点都减少;社会挫败模型小鼠的骨髓在移植后造血重建过程中粒细胞、T细胞、B细胞比例绝对数在一定时间点都增加。结论短期心理应激能够增加骨髓中B细胞的数量,减少外周免疫器官中B细胞的数量。而长期心理应激对脾脏和骨髓中B细胞的影响都是降低其数目。心理应激对于不同B细胞亚群的比例变化影响是不同的,发育相对完全的Mature B细胞受到应激刺激的影响相对较小,在B细胞中其亚群比例是增高的;而脾脏和骨髓中的PreB、Pro B、T1 B、T2 B、FO B等B细胞亚群比例是降低的。心理应激对B细胞及各亚群的影响可能与糖皮质激素受体含量有关,B细胞亚群受体含量越多应激刺激后细胞凋亡程度越大;心理应激对B细胞各亚群的影响还可能与肾上腺素β受体有关。心理应激能够影响小鼠自身的造血干细胞,并且这种影响是长期存在的。