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第一部分负压伤口治疗(NPWT)对兔耳增生性瘢痕形成影响的研究目的:建立兔耳增生性瘢痕动物模型,研究负压伤口治疗(negative pressure wound therapy,NPWT)对创面愈合和增生性瘢痕形成的影响。方法:选取6只新西兰大白兔,随机编号1～6号,于两侧兔耳腹侧设计并形成单个直径2cm的圆形创面。实验采用自身配对研究,NPWT组:左侧兔耳创面,采用NPWT,负压为-125mm Hg(-17k Pa),持续模式,每天治疗8小时,连续治疗7天后,创面凡士林油纱覆盖,纱布包扎,隔天更换,直至创面愈合;对照组(传统敷料组):右侧兔耳创面,凡士林油纱覆盖,安多福纱包扎,隔天换药,直至创面愈合。创面形成后第8天,观察创面分泌物、水肿和血运情况评估创面炎症反应。以创面痂皮全部脱落确定创面愈合时间。创面形成后第42天,采用温哥华瘢痕评分(vancouver scar scale,VSS)方法评估瘢痕形成情况,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色)、Masson染色、苦味酸-天狼星红染色以及免疫组织化学方法结合image-pro plus 6.0软件分析检测组织瘢痕厚度、Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白(collagen type-Ⅰ/Ⅲ,COL-Ⅰ/Ⅲ)含量、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteine aspastic acid-specific protease-3,Caspase-3)的表达。采用Western-Blot检测两组瘢痕组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和α-SMA蛋白的含量。数据应用SPSS 13.0统计软件进行统计,结合配对样品t检验分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:NPWT组在创面形成后第8天时创面干洁,分泌物少,水肿轻,血运良好,而对照组创面分泌物仍较多,水肿未完全消退,颜色苍白灰暗,血运稍差,NPWT组炎症反应较对照组轻。NPWT组创面愈合天数为22.500±3.728天,低于对照组30.000±5.215天(P<0.05)。NPWT组瘢痕增生程度(VSS)为5.500±1.643分,低于对照组9.500±1.049分(P<0.05)。NPWT组组织瘢痕厚度为604.480±97.492um,低于对照组895.653±79.605um(P<0.05)。NPWT组瘢痕组织中COL-Ⅰ的含量为6.642±2.609%,低于对照组12.249±4.305%(P<0.05)。NPWT组瘢痕组织中COL-Ⅲ的含量为9.535±3.099%,高于对照组5.305±2.493%(P>0.05)。NPWT组瘢痕组织中α-SMA阳性成纤维细胞数为4.238±0.526%,低于对照组13.164±1.317%(P<0.05);NPWT组瘢痕组织中α-SMA蛋白含量为0.932±0.297,低于对照组的1.650±0.391(P<0.05)。NPWT组瘢痕组织中Caspase-3蛋白含量为4.567±2.580%,高于对照组为3.391±1.949%(P>0.05)。NPWT组瘢痕组织中TGF-β1蛋白含量为0.981±0.082,低于对照组的1.982±0.261(P<0.05)。结论:结果显示NPWT能够促进创面愈合,减轻增生性瘢痕的形成。NPWT能通过抑制TGF-β1的产生,降低成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,从而发挥减轻增生性瘢痕形成的作用。第二部分负压伤口治疗(NPWT)对兔耳增生性瘢痕疗效的观察目的:建立兔耳增生性瘢痕模型,观察NPWT对增生性瘢痕的影响,探索增生性瘢痕治疗的新方法。方法:6只新西兰大白兔,随机编号为7～12号,分别于两侧兔耳腹侧设计并形成单个直径2cm圆形创面,创面凡士林油纱覆盖,安多福纱布包扎,隔天换药,直至创面愈合,建立兔耳增生性瘢痕模型。双侧创面形成后第30天均形成了增生性瘢痕,采用VSS评估双耳增生性瘢痕。实验采用自身配对研究,NPWT组:右耳增生性瘢痕,采用NPWT(方法同第一部分)治疗7天;对照组:左耳增生性瘢痕,在瘢痕上用多层纱布绷带加压包裹治疗7天。动物处理完后,继续原环境喂养,定期记录拍照。NPWT治疗结束后第6天,采用VSS评估瘢痕增生情况,取双侧瘢痕组织,切片进行HE染色、Masson染色、苦味酸-天狼星红染色以及免疫组织化学染色,结合image-pro plus 6.0软件分析检测组织瘢痕厚度、COL-Ⅰ/Ⅲ的含量、α-SMA蛋白和Caspase-3蛋白的表达。Western-Blot检测瘢痕组织中TGF-β1蛋白和α-SMA蛋白的含量。数据应用SPSS 13.0软件进行统计,结合配对样品t检验分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:创面形成后第30天,两组创面完全愈合,两组瘢痕形成相近,瘢痕颜色鲜红,稍高出正常皮肤表面,中央凸起不明显,质地软,两组瘢痕VSS-1:NPWT组为6.170±1.169分,对照组为6.667±1.211分,差异没有统计学意义(P>0.05)。NPWT治疗结束后第6天,NPWT组瘢痕增生较对照组轻,瘢痕VSS-2:NPWT组为5.500±1.225分,低于对照组8.667±1.506分(P<0.05)。NPWT组组织瘢痕厚度为305.161±86.839um,低于对照组652.080±221.237um(P<0.05)。NPWT组瘢痕组织中COL-Ⅰ的含量为5.537±1.316%,低于对照组为12.471±4.847%(P<0.05)。NPWT组瘢痕组织COL-Ⅲ的含量为6.836±3.025%,高于对照组为4.444±1.898%(P<0.05)。NPWT组瘢痕组织中α-SMA蛋白含量为1.428±0.427,低于对照组为1.777±0.374(P>0.05)。NPWT组瘢痕组织中Caspase-3蛋白含量为5.286±0.833%,高于对照组为2.597±0.847%(P<0.05)。NPWT组瘢痕组织中TGF-β1蛋白含量为1.315±0.338,低于对照组为1.637±0.374(P>0.05)。结论:结果表明NPWT对增生性瘢痕的疗效显著,其作用主要与促进成纤维细胞凋亡有关。