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马铃薯是世界第四大粮食作物,仅次于小麦、水稻、玉米,而马铃薯病毒是危害马铃薯的主要病原,且常以复合侵染的方式危害马铃薯。麝香石竹潜隐病毒属的马铃薯S病毒(Potato virus S, PVS)和马铃薯Y病毒属的马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)是危害马铃薯的两种重要病毒,对马铃薯的生产造成巨大的经济损失。目前,对于马铃薯病毒病最主要的防治手段是通过种植脱毒种薯,而建立准确、快速、经济、高通量的检测技术是生产脱毒种薯的关键。以单抗为核心的血清学检测技术具有操作简便、快速、准确、经济、高通量等特点,是目前植物病毒最主要的检测和诊断技术。为了建立PVS和PVY的快速、实用检测技术,本论文分别制备了PVS和PVY的特异性单抗,并以单抗为核心分别建立了这两种病毒特异、灵敏的血清学检测方法,从而为我国马铃薯病毒的检测、检疫以及无毒种薯的生产和科学防控体系的建立提供技术和物质支持。(1)PVS单克隆抗体的制备及其检测应用：以提纯的PVS病毒粒子作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了5株能稳定传代并分泌PVS单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1A3、16C10、18A9、20B12、22H4)。杂交瘤细胞分泌的单抗腹水间接ELISA效价均达到10-6以上。通过Western blot分析推测这5株单抗均与PVS的外壳蛋白有特异性反应。以制备的单抗为核心建立了检测马铃薯植株中PVS的ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA和Tissue blot-ELISA4种血清学方法。特异性分析结果显示,这4种血清学方法检测感染PVS的马铃薯植株呈阳性反应,而检测健康的马铃薯及感染其他4种马铃薯病毒的植株呈阴性反应。灵敏度分析结果表明,ACP-ELISA、DAS-ELISA和dot-ELISA检测马铃薯病叶的灵敏度分别达到1：81920,1：163840和1：10 240倍稀释(w/v, g/mL)。用建立的血清学方法对2015年采自云南的22个田间马铃薯样品进行检测,检测结果发现,其中14个检测样品感染PVS,且该检测结果与RT-PCR的检测结果一致,PCR产物的核酸序列分析表明,血清学方法检测的阳性样品中确实含有PVS。(2)PVY单克隆抗体的制备及其检测应用：以提纯的PVY病毒粒子免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了4株能稳定传代并分泌PVY单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3B2、3E4、20B2、25C2)。杂交瘤细胞分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10-6以上。通过Western blot分析推测382、3E4和20823株单抗可能与PVY的外壳蛋白有特异性反应,而25C2单抗与感染PVY的病叶组织中大小约55kDa的蛋白有特异性反应,根据分子量推测25C2单抗针对的抗原可能是HC-Pro蛋白或者VPg前体。以制备的单抗为核心建立了检测植株中PVY的ACP-ELISA、dot-ELISA、Tissue blot-ELISA和IC-RT-PCR 4中血清学方法。特异性分析结果显示,这4种血清学方法检测感染PVY的样品呈阳性反应,而与健康的烟草、马铃薯及感染其他4种马铃薯病毒的植株呈阴性反应。灵敏度分析结果表明,ACP-ELISA和dot-ELISA检测马铃薯病叶的灵敏度分别达1：81920和1：10240倍稀释(w/v, g/mL),而具有最高检测灵敏度的IC-RT-PCR方法在感病植物组织稀释到1：5242880倍(w/v, g/mL)时仍能检测到病毒。用建立的血清学方法对2015年采自云南的30个田间马铃薯样品进行检测,检测结果发现,其中有20样品感染PVY,且建立的血清学方法的检测结果与IC-RT-PCR、RT-PCR检测结果一致,PCR产物的核酸序列分析表明,检测的阳性样品中确实含有PVY。