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目的:(1)观察肾小球足细胞上结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)的表达,以及转化生长因子β<,1>(Transforming growth factor β<,1>,TGFβ<,1>)、血小板生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)和血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)对CTGF表达的影响.(2)探讨TGFβ<,1>刺激足细胞CTGF表达可能的信号途径.方法:(1)体外培养的小鼠足细胞分别用TGFβ<,1>、PDGF和AngⅡ刺激,以蛋白印迹分析(Western Blot)、反转录-聚合酶链反应(Reverse transcript-polymerase chain reaction,RT-PCR)和细胞化学免疫荧光技术分别检测不同刺激因子对CTGF蛋白和(或)mRNA表达的影响.用不加刺激物的足细胞作对照.(2)以不同浓度的TGFβ<,1>刺激足细胞12h,或1ng/ml TGFβ<,1>刺激足细胞不同时间,Western Blot分别检测TGFβ<,1>刺激Smad2和细胞外信号调节激酶(Extracelluar regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)活化的剂量依赖曲线和时间依赖曲线.用不加刺激物的足细胞作对照.(3)用丝/苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine和ERK1/2活化抑制剂PD98059分别阻断Smad2和ERK1/2的活化,探讨TGFβ<,1>调节CTGF表达的可能信号传导途径.细胞分为不加刺激的对照组、单独TGFβ<,1>刺激组、单独阻断剂处理组和阻断剂预处理后TGFβ<,1>刺激组.用Western Blot分别检测Smad2、ERK1/2途径的活化和CTGF蛋白的表达水平.结果:(1)TGFβ<,1>可显著上调足细胞CTGF蛋白的表达,而PDGF和AngⅡ对其表达没有影响.(2)TGFβ<,1>可以上调足细胞CTGF mRNA的表达.(3)TGFβ<,1>可以活化Smad2和ERK1/2途径,不能活化p38途径,而在足细胞上未能检测到JNK蛋白的表达.(4)Staurosporine和PD98059能分别阻断Smad2和ERK1/2的磷酸化(活化).(5)阻断Smad2途径能消减TGFβ<,1>对CTGF蛋白的上调作用,而阻断ERK1/2途径没有达到此效果.结论:(1)TGFβ<,1>能显著刺激足细胞CTGF的表达,而公认的促纤维化因子PDGF和AngⅡ不能.(2)TGFβ<,1>刺激足细胞表达CTGF的作用可能是通过活化Smad2途径介导的,而与ERK1/2途径的活化无关,后者可能参与介导了TGFβ<,1>在足细胞上的其它生物学效应.