人纤维蛋白凝胶及其复合支架的制备与性能

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本文构建纤维蛋白凝胶和聚乳酸(PLLA)多孔支架或聚(乳酸—乙醇酸)(PLGA)微载体的复合支架。采用冷冻—冻干的方法从人血浆中提取了纤维蛋白原,在凝血酶的作用下形成纤维蛋白凝胶。采用热致相分离的方法制备了多孔的PLLA支架。采用乳液挥发的方法制备了PLGA微球,并用纤维蛋白原对微球进行表面修饰。将纤维蛋白凝胶和PLLA多孔支架、PLGA微载体复合,分别制备了纤维蛋白凝胶填充的PLLA多孔支架和纤维蛋白凝胶与PLGA微载体的复合支架。采用冷冻—冻干的方法从人血浆中提取了纤维蛋白原。将等体积的纤维蛋白原溶液与凝血酶溶液混合,制备了纤维蛋白凝胶。采用紫外光谱跟踪了凝胶的形成过程,发现凝血酶浓度、反应温度对凝胶时间有决定性影响,而纤维蛋白原浓度对凝胶时间的影响较小。经二氧化碳临界点干燥后,采用扫描电镜观察了不同条件下形成的纤维蛋白凝胶的微观结构。热稳定分析显示纤维蛋白原形成凝胶后,热分解温度提高到288℃,比纤维蛋白原的热分解温度提高了30℃左右。在三蒸水中平衡11小时后,纤维蛋白凝胶的吸水率从最初的50倍下降到30~40倍。通过紫外光谱跟踪检测,测定了纤维蛋白凝胶在不同溶液中的失重。体外细胞培养表明,成纤维细胞可以在凝胶中很好地铺展和增值。纤维蛋白凝胶的长期稳定性,对所修复组织的重建和再生至关重要。为了减缓纤维蛋白凝胶的降解和流失,我们进一步构建了纤维蛋白凝胶填充的PLLA多孔支架的复合支架。首先利用热致相分离的方法制备了PLLA多孔支架,将纤维蛋白凝胶填充到PLLA支架中,制备了纤维蛋白凝胶填充的PLLA复合支架。测定了不同填充条件形成复合支架的填充率和凝胶释放。分别测定了PLLA支架和填充的复合支架的力学性能,发现复合支架比PLLA支架具有更好的力学性能。体外软骨细胞培养实验表明,与未填充的PLLA多孔支架相比较,纤维蛋白凝胶填充的PLLA支架能有效的负载细胞,同时维持细胞的球状形态,有效地促进细胞的生长和活性物质的分泌。采用乳化溶剂挥发法制备了PLGA微球。采用氨解和接枝技术相结合的方法,在PLGA微球表面固定了纤维蛋白原分子,以提高PLGA微球的细胞相容性。氨解过程中,微球重量随氨解时间线性下降,而微球表面的自由氨基随氨解时间的延长,先增加后恒定在一稳定值。采用戊二醛为偶联剂,将纤维蛋白原接枝在PLGA微球表面。纤维蛋白原的固定量随自由氨基含量的增加而增大。将纤维蛋白原与PLGA微载体均匀混合,在凝血酶的作用下形成纤维蛋白凝胶/PLGA微载体复合支架。通过激光共聚焦显微镜原位观测了复合支架的结构,并进一步利用扫描电镜观察了冻干处理后支架的形貌。通过调节凝血酶的浓度可以有效地阻止微载体的沉降。微载体/凝胶复合物的弹性模量随着微载体加入量的增加而增大,但总体模量值较低。体外软骨细胞培养表明细胞在微载体/凝胶复合支架中能够生长和增殖。细胞活性随着培养时间的延长而增加,而后保持不变。软骨细胞在凝胶内为圆形,而在微载体表面呈铺展的多边形。凝胶中软骨细胞会随着纤维蛋白凝胶的降解后向PLGA微载体表面迁移,铺展和增殖。
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