TRPM7通道在新生大鼠心肌细胞功能的初步研究

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目的:研究TRPM7在新生大鼠心肌细胞中的功能方法①利用RT-PCR半定量检测大鼠心肌细胞TRPM7和其他六种Mg2+转运体在出生后不同时间的表达情况。②原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,用siRNA技术和TRPM7通道阻断剂2-APB分别作用于心肌细胞,RT-PCR,蛋白免疫印迹检测siRNA的沉默效率和流式细胞术检测细胞凋亡情况。实验数据均采用SPSSll·5软件对结果进行统计学分析。结果①RT-PCR半定量观察到大鼠心肌细胞上七种Mg2+转运蛋白在出生后不同时期都有不同程度的表达,其中TRPM7在各个时期表达较稳定,并且表达量明显高于其他六种Mg2+转运蛋白。②培养的大鼠乳鼠心肌细胞中经RT-PCR和蛋白免疫印迹检测,siRNA下调TRPM7效率在mRNA水平和蛋白水平均在70%以上;流式细胞术检测细胞凋亡率数据:转染TRPM7-siRNA实验组细胞凋亡率为(33.69±2.06)%,与转染无序siRNA对照组细胞(10.43±0.99)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。③采用不同浓度2-APB(0.01uM0.1uM1.0uM)孵育,实验组细胞凋亡率分别为(19.00±0.87)%,(23.06±1.48)%和(28.41±0.94)%。其中加药0.1uM验组与未加药对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),加药1.0uL实验组与未加药对照组(17.8±0.49)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论TRPM7对心肌细胞的生存有重要的作用。这种作用可能与TRPM7参与的细胞内Mg2+稳态有关。Mg2+是细胞内重要的二价阳离子,它不仅是多种酶的辅助因子,而且参与维持生物大分子的正确构象、第二信使的调控、电荷补偿、调控离子通道活性等重要生命活动。
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