腺病毒是一种常见病毒，其中3型和7型是引起呼吸道感染和咽结膜热等感染的重要致病因子。现有的流行病学调查结果显示这两种血清型的腺病毒对密集人群，低免疫人群和学龄前儿童都有较强的致病性并常常会引起严重的后果。曾经在人群中使用过的腺病毒疫苗是肠衣包裹的活病毒，而且只针对4型和7型。研制一种可以针对中国流行血清型的腺病毒疫苗，经过一种疫苗的免疫可以达到同时对3型和7型腺病毒的免疫，这样一个研究目的也就非常有必要。本论文正是针对这个目的，在已有的带有eGFP荧光标记基因的重组人3型腺病毒的基础上，通过软件预测选取广州地区流行的7型腺病毒上可能的中和抗体针对序列，并通过重叠延伸PCR和大肠杆菌基因同源重组等方法，获得带有7型腺病毒可能中和抗体针对序列的重组3型腺病毒，并采用RT-PCR和细胞荧光观察的方法对其活性作出评估。最后，通过免疫小鼠，对所得到针对4个不同高变区序列的重组腺病毒的免疫学性质，对小鼠的保护程度等免疫学特点进行了了解，具体结果如下：　　 1.使用细胞培养的方法分离到在广州地区流行的7型腺病毒野生型(GZ8株)。在电镜下观察这种分离株病毒可以发现其具有典型腺病毒颗粒特征。然后我们对其进行了全基因测序，利用生物信息学软件对基因组进行了详细的注释和比对。通过限制性酶切分析等方法确认本分离株的属于HAdV-7型，病毒基因组全长35306bp，碱基组成分别为25.37％A(8958)，25.77％C(9100)，25.25％G(8914)，和23.61％T(8334)。与其他哺乳动物腺病毒一样，分离的7型腺病毒(GZ8)株基因组结构分为E区、中间区和L区3个转录区，均含有39个DNA编码序列和2个RNA编码序列。其它的非编码特征，如启动子和转录因子结合与识别位点，相对比较保守。基因组中存在一定长度的回文结构和数个反转重复序列，最典型的就是反向末端重复序列。　　 2.以带有eGFP报告基因的人3型腺病毒质粒pBRAd△E3eGFP为骨架，将其六邻体基因的4个高变区中可能为中和抗体识别位点的序列由人7型腺病毒(GZ8株)相关区的序列置换。首先构建了4种含有3型腺病毒基因组中六邻体基因两末端序列的拯救质粒pBR-L-R-MH1/2/5/7，并对该系列质粒进行PCR鉴定，结果与预期完全一致。采用大肠杆菌BJ5183内同源重组的方法，将提取的重组3型腺病毒pBRAd△E3eGFP基因组DNA与构建好的通过酶切线性化L-R-MH1/2/5/7片段在BJ5183内进行同源重组，通过PCR方法和限制性酶切的方法筛选获得了3，7型六邻体嵌合腺病毒基因组质粒克隆pBRAd△E3eGFP-MH1/2/5/7，并通过PCR鉴定和限制性酶切的方法进行了序列鉴定，结果与预期一致。为了验证其感染性，将重组的四种腺病毒基因组质粒DNA通过单一的限制性内切酶AsiSI酶切，从重组克隆质粒pBRAd△E3eGFP-MH1/2/5/7内释放出来，转染到相应的宿主细胞HEp-2内，通过荧光显微镜观察到eGFP基因的瞬时高效表达，连续盲传几代后，观察到细胞出现典型的致细胞病变，进一步通过透射电子显微镜观察到了转染后产生的腺病毒粒子Ad△E3eGFP-MH1/2/5/7大小及形态与原型腺病毒无明显区别。对转染获得的腺病毒提取基因组进行酶切鉴定，结果符合预期，这说明我们获得的腺病毒与原型腺病毒在基因组水平上是一致的。　　 3.通过比较重组病毒Ad△E3eGFP-MH1/2/5/7和原型病毒Ad△E3eGFP的生长速度，发现除了Ad△E3eGFP-MH7重组病毒生长较慢外，其他三种重组病毒和原型3型腺病毒的生长速度基本没有差异。在对重组病毒传代10代后病毒进行RNA反转录，以突变区的特性引物对目的片段扩增中，发现结果提示重组病毒没有进一步突变成原型或者缺失突变区的情况发生，遗传稳定。　　 4.进一步对重组腺病毒的免疫学性质进行研究，将原型病毒和重组病毒及它们免疫动物后产生的免疫血清做交叉的中和试验，并对经过上述各种病毒免疫的动物用7型野生型腺病毒作攻毒试验。发现MH2和MH5相关的高变区HVP2和HVP5是人7型腺病毒的中和抗原位点所在区，其中MH5则是较为确定的一个，MH1和MH7则不是。这些中和表位的明确无疑会为下一步的“多价”疫苗奠定基础，也为把Ad3做为“抗原表位展示系统”做了必要的基础工作。