动物的先天免疫中TLR(Toll-like receptor)信号通路在机体中起着举足轻重的作用。文昌鱼因拥有繁琐有序的先天免疫系统,同时兼有特异性免疫的雏形,逐渐成为研究动物免疫系统的模型。Micro RNA(mi RNA)是生物体内的一类具有调控功能的非编码小RNA,已有的报道显示mi R-92家族的多个成员均参与免疫调节。白氏文昌鱼mi RNA的研究主要尚处于通过高通量测序的方法筛选免疫相关的mi RNA阶段,亟待深入开展功能研究。结合文昌鱼特殊的进化地位,本论文围绕mi R-92家族参与文昌鱼TLR通路先天免疫调控开展研究,并进一步对mi R-92家族的进化进行分析,获得了以下的结果:1.本研究对mi R-92家族的系统进化进行了分析,以白氏文昌鱼的mi R-92家族为例,预测可能编码的前体mi RNA茎环结构的稳定性。对不同物种mi R-92家族序列比对发现,mi R-92a和mi R-92b在大部分物种中存在。海胆中存在的该家族成员最多,文昌鱼的bbe-mi R-92b与其它物种的保守性相比较要高于bbe-mi R-92b与物种内其他成员(bbe-mi R-92a、bbe-mi R-92c、bbe-mi R-92d、bbe-mi R-92e)的保守性。结合不同物种mi R-92家族的进化树的结果,我们推断mi R-92b应当是更古老和保守的基因。2.对文昌鱼mi R-92b可能靶向的基因进行GO注释及KEGG富集分析。发现靶基因在生物过程、细胞组分和分子功能方面的GO富集在代谢过程、生长发育等生命活动中;KEGG分析可以富集到MAPK通路。已知MAPK通路与TLR通路能够形成crosstalk,所以进一步推测mi R-92b可能参与免疫调节。此研究为更好的了解文昌鱼mi R-92家族的信息提供了支持。3.利用mi Randa及RNA22v2软件预测mi R-92家族参与调控TLR信号通路的潜在靶基因,结果发现在文昌鱼的TLR通路中,bbe-mi R-92b-5p能够潜在的靶向IKK基因。4.采用双荧光素酶报告系统实验检测bbe-mi R-92b-5p与潜在靶基因IKK的靶向关系,结果显示bbe-mi R-92b-5p能够靶向IKK基因的编码区参与其调控。此外,我们又进一步通过western blot方法验证了bbe-mi R-92b-5p与IKK基因的靶向作用。5.对文昌鱼bbe-mi R-92b-5p及IKK基因的组织表达模式分析显示,bbe-mi R-92b-5p及IKK基因在所检测的性腺、鳃、肝盲囊、肠和肌肉五个组织中均有表达。其中bbe-mi R-92b-5p基因在性腺和肝盲囊中表达较高,在肌肉中表达较低;与此相反,IKK基因则在肌肉和鳃中表达较高,在性腺中表达较低。LPS刺激后不同时间点(2 h,4 h,8 h,12 h,24 h和48 h)bbe-mi R-92b-5p的表达量存在显著上调。在此基础上,我们又进一步对LPS刺激12h、24h及48h后IKK的蛋白表达量进行了分析,结果显示IKK蛋白在刺激后12h表达量下调,而在48h又出现上调。6.另对不同物种IKK基因与mi R-92家族的预测分析发现大部分的物种IKK基因能预测到与mi R-92家族的靶向关系。虽然存在假阳性,但也反映了mi R-92b可能在进化过程中功能保守,因此我们的研究也为mi R-92b在其它物种参与免疫通路的调控研究奠定基础。