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目的:研究RNA结合蛋白RBM38在乳腺癌中调节HER-2表达的具体机制,并进一步研究RBM38增加曲妥珠单抗敏感性的的机理。探讨RBM38与HER-2之间的生物学效应以及在乳腺癌生物靶向治疗中的意义。材料和方法:用免疫组化的方法检测组织芯片90例乳腺癌组织中RBM38和HER-2的表达情况;用免疫组化的方法检测江苏省人民医院乳腺外科从2005年至2012年中29例术后使用曲妥珠单抗病人标本的RBM38表达情况;检索GEO数据库中53例使用曲妥珠单抗病人中RBM38的表达数值。运用慢病毒转染法,在乳腺癌细胞株SK-BR-3、MDA-MB-453中分别构建RBM38的过表达和敲除模型,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测转染效率并检测RBM38和HER-2的mRNA和蛋白的表达水平。用放线菌素D分别处理RBM38过表达(RBM38)和对照(NC)细胞株,及RBM38敲除(shRBM38)和对照(SCR)细胞株,在各个时间点(0,2,4,8小时)用qRT-PCR检测剩余的HER-2 mRNA表达情况。运用RNA免疫共沉淀(RIP)实验检测RBM38和HER-2 mRNA的结合情况,双荧光素酶报告实验检测RBM38结合HER-2 mRNA的具体位点。用CCK-8实验检测RBM38过表达和敲除细胞株在曲妥珠单抗处理之后的细胞生长抑制率的变化情况。细胞凋亡实验检测RBM38过表达和敲除细胞株在曲妥珠单抗处理之后的细胞凋亡率的变化情况。平板克隆形成实验检测RBM38过表达细胞株在曲妥珠单抗处理之后的细胞长期生长抑制情况。动物实验体内验证RBM38过表达细胞株在曲妥珠单抗处理之后肿瘤的生长抑制情况。结果:在乳腺癌的组织芯片组织中,HER-2表达高的标本中RBM38蛋白表达明显增加;HER-2表达低的标本的RBM38表达明显降低,差别有统计学意义(p<0.05)。江苏省人民医院29例使用曲妥珠单抗的术后标本中,随访预后较好的乳腺癌病人中,RBM38蛋白的表达较高;随访预后较差的乳腺癌病人中,RBM38蛋白的表达较低,RBM38蛋白表达高低和预后的差异有统计学意义(p<0.05)。GEO数据库中53例使用曲妥珠单抗的乳腺癌标本,RBM38表达数值高的乳腺癌较RBM38表达数值低的乳腺癌病人无病生存率高(DFS)(P=0.0343)。在SK-BR-3和MDA-MB-453细胞株中,外源性过表达RBM38后,HER-2的表达明显增多;而RBM38敲除后,HER-2的表达也明显降低。在mRNA稳定实验中,RBM38过表达后,HER-2的mRNA稳定性增强;RBM38敲除后,HER-2的mRNA稳定性随之降低。双荧光素酶报告基因实验和RNA免疫共沉淀实验表明RBM38能与HER-2的mRNA3’端非编码区AU/U富含区域结合。CCK-8实验显示曲妥珠单抗处理后的RBM38过表达细胞的生长抑制率高于相应对照组(NC);RBM38敲除细胞的生长抑制率低于相应的对照组(SCR)。细胞凋亡实验显示曲妥珠单抗处理后的RBM38过表达细胞的凋亡率高于相应的对照组(NC);RBM38敲除细胞的生长抑制率低于相应的对照组(SCR)。平板克隆形成实验显示曲妥珠单抗处理后RBM38过表达细胞的长期抑制效应较对照组(NC)高。动物实验中,RBM38过表达实验组裸鼠的肿瘤体积小于对照组(NC)的肿瘤体积;在曲妥珠单抗的处理下,RBM38过表达实验组裸鼠肿瘤的生长抑制率高于对照组(NC)。结论:在乳腺癌组织中RBM38与HER-2的表达存在正相关。RBM38高表达的乳腺癌预后较RBM38低表达的乳腺癌预后好。外源性过表达RBM38能增加HER-2的表达,敲除RBM38能减少HER-2的表达。RBM38能与HER-2的mRNA的3’端非编码区AU/U富含区域结合并增强其稳定性。体内体外实验说明,在曲妥珠单抗的处理下,RBM38高表达能抑制乳腺癌细胞和乳腺肿瘤的生长。RBM38通过增加HER-2的表达进而增加曲妥珠单抗的敏感性这一现象有望为乳腺癌生物靶向治疗提供新的方向。