【摘 要】
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黄梁木(Neolamarckia cadamba),为茜草科团花属常绿阔叶乔木,是一种重要经济速生林木,具有较高应用前景和开发价值。但目前黄梁木的研究主要集中于种质资源收集、组织培养及
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黄梁木(Neolamarckia cadamba),为茜草科团花属常绿阔叶乔木,是一种重要经济速生林木,具有较高应用前景和开发价值。但目前黄梁木的研究主要集中于种质资源收集、组织培养及快繁体系建立和药用价值开发等方面,其细胞学研究相对较少,遗传背景尚不清晰。本文旨在利用染色体制片方法研究黄梁木染色体数目,为全基因组测序和遗传图谱的构建奠定基础。本研究通过建立黄梁木染色体制片体系,获得适合黄梁木染色体观察的制片方法,即改良压片法,进而确定黄梁木染色体数目。制片体系主要步骤如下:1、以黄梁木(Neolamarckia cadamba)组培苗根尖为试验材料进行染色体压片。在9:00-10:00取材,其染色体中期分裂指数最高,达4.7%;其次黄梁木根尖生长长度不应过长,一般控制在3-6 mm为宜。2、以0.10%秋水仙素溶液和2 mM 8-羟基喹啉等体积混合液作为预处理液,于25℃处理3 h,其中期分裂相染色体分散良好且易于计数。3、以75 mM KCl溶液作为前低渗液,于25℃处理30 min压片效果最好,染色体分散于整个细胞中。4、以新鲜配制的卡诺固定液于4℃固定24 h细胞状态最好,细胞质背景最清晰。5、以1 M盐酸作为解离试剂,在恒温60℃水浴条件下解离根尖6 min,细胞壁软化程度刚好,压片时细胞分散性最好。6、以去离子水与75 mM KCl溶液对根尖组织后低渗30 min,压片结果显示染色体分散程度均较好且差别不大,因此为提高制片效率,采用去离子水作为后低渗液。7、以卡宝品红作为染剂染色2 min效果最好,细胞核和染色体为紫红色,细胞质接近无色,对比明显。8、黄梁木体细胞染色体数目为2n=44,根据前人对茜草科的研究,推测其染色体基数X=11,是四倍体。
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