实验目的：临床研究证实孕期摄入咖啡因会对胎儿正常发育造成不利影响,但具体作用机制尚未有定论。本课题运用鸡胚发育模型研究咖啡因对鸡胚神经发育的影响,以揭示咖啡因干预引起胎儿不良后果的部分机制,旨在为孕期合理安全的饮食提供科学依据,降低产生畸形儿的风险,以提高胎儿质量。实验方法：(1)1.5日龄鸡胚分别气室注射0.5 mg、1.0 mg及1.5 mg咖啡因作用36 h后,采用卡红染色技术及免疫组化法观察咖啡干预对鸡胚神经管组织形态发育的影响。(2)8日龄鸡胚气室注射0.5 mg、1.0 mg及1.5 mg咖啡因,利用高效液相色谱法测定咖啡因干预后不同发育阶段脑组织中咖啡因的蓄积量。(3)8日龄鸡胚一次或多次给以0.5 mg、1.0 mg及1.5 mg咖啡因刺激,采用高效液相色谱法测定17日龄鸡胚脑组织单胺类神经递质含量。(4)利用RT-PCR技术对干扰神经递质含量的相关酶基因表达进行测定。实验结果：(1)卡红染色结果显示咖啡因组鸡胚均出现神经管闭合缺陷,且可见组织结构变形,细胞排列不规等现象。免疫组化结果显示1.0 mg咖啡因可致神经嵴细胞分布不均,1.5 mg咖啡因可抑制神经嵴细胞的迁移运动。(2)8日龄鸡胚以不同剂量咖啡因刺激,咖啡因在鸡胚脑组织内的含量呈递增趋势,且主要以原型形式存在于脑中,并与干预剂量有关。(3)1.0 mg与1.5 mg咖啡因对8日龄鸡胚的干预可致其脑组织5-羟色胺等相关单胺类神经递质含量显著增加(P<0.05),且咖啡因多次干预组与一次性干预组相比,其含量变化更为显著。(4)RT-PCR结果表明1.0 mg及1.5 mg咖啡因组的相关酶基因的表达发生改变,色氨酸羟化酶-2基因表达显著增高(P<0.05)。实验结论：(1)0.5 mg咖啡因可导致神经胚期鸡胚发育缺陷,高剂量还可影响神经脊细胞的分布与迁移。(2)咖啡因引起鸡胚神经发育畸形的病因基础可能是其在鸡胚脑组织不断蓄积,浓度过高所致。(3)中高剂量咖啡因可致鸡胚脑组织单胺类神经递质含量水平异常,且与干预次数相关。(4)咖啡因影响脑组织5-羟色胺等单胺类神经递质的含量水平,其造成神经递质水平紊乱的作用机制可能是通过上调相关酶基因的表达实现的。