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背景： 多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）是育龄女性群体中较常见的一种以月经失调、持续无排卵、雄激素过高、不孕、胰岛素抵抗等病变为特征的异质性疾病，是妇科生殖内分泌研究领域中的热点和难点问题。近年来，PCOS的发病率呈上升趋势，然而，受限于其复杂的病理及生理变化，PCOS的具体发病机制仍未彻底阐明，故而无法对其进行根除性治疗。因此，针对PCOS发病过程的分子机制进行更为深入的基础研究，对于发现新型诊断方法和治疗策略非常必要。 长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lncRNA）是一类不具有典型的编码蛋白质功能的较长单链RNA分子，能够在表观遗传、转录乃至转录后水平调控基因的表达变化，同时参与对细胞以及胚胎发育过程中，相关基因表达的调控以及机体稳态的维持。LncRNA SRA即类固醇受体RNA活化因子（Steroid receptor RNA activator,SRA）是一种能够协调多种转录因子功能的长链非编码RNA。目前研究显示，lncRNA SRA能够影响包括类固醇受体信号、脂肪生成、胰岛素敏感性等在内的多种生物学过程，而这些过程均可能涉及到PCOS的发病。此外，在患有PCOS的患者外周血单核细胞中，lncRNA SRA水平存在异常升高，但其作用及具体分子机制仍未明确。我们推测，lncRNA SRA在PCOS的发生发展中可能具有重要作用，其对血管生成及炎性反应等的调控可能是其发挥作用的分子机制。 目的： 为明确lncRNA SRA在多囊卵巢综合征中的作用及相关机制，本研究在建立PCOS模型小鼠的基础上，对lncRNA SRA水平进行了调控，深入探讨其对PCOS的影响及可能作用机制，并通过体外实验进一步进行验证，力求为PCOS探索新的治疗靶点及更为有效的临床治疗手段，提供理论基础及实验依据。 方法： 1.检测PCOS患者卵巢颗粒细胞及PCOS模型鼠卵巢组织中lncRNA SRA的表达 （1）收集临床确诊的PCOS患者卵巢颗粒细胞，Real-time PCR检测临床样本中lncRNA SRA的表达水平； （2）取健康雌性C57BL/6小鼠，随机分为实验组及对照组，其中实验组采用皮下注射60mg/kg/day脱氢表雄（甾）酮的方法建立多囊卵巢综合征模型，对照组给予等体积芝麻油皮下注射，连续注射20天后，测定所有小鼠的空腹血糖和胰岛素水平，并计算胰岛素抵抗系数，选取该系数大于2.8的小鼠用于后续实验； （3）HE染色检测小鼠卵巢组织的形态学改变； （4）Real-time PCR检测lncRNASRA在小鼠卵巢组织中的表达水平； 2.shRNA介导的lncRNA SRA表达下调，减轻小鼠多囊卵巢综合征及其胰岛素抵抗 （1）设计并合成lncRNA SRA的干扰片段和无关序列片段，将上述片段分别构建至慢病毒载体中，获得lncRNA SRA的干扰质粒和control对照质粒；PCOS小鼠平均分为2组，多囊卵巢综合征+control对照质粒组和多囊卵巢综合征+SRA干扰质粒组，同时采用正常的雌性小鼠作为对照；其中多囊卵巢综合征+control对照质粒组和多囊卵巢综合征+SRA干扰质粒组分别经卵巢被膜下注射control对照质粒和SRA干扰质粒，注射2周后，采用文献报道的方法检测各组小鼠的胰岛素抵抗情况，绘制胰岛素水平曲线，然后处死小鼠取卵巢组织； （2）HE染色检测小鼠卵巢组织的形态学改变； （3）Real-time PCR检测lncRNA SRA在小鼠卵巢组织中的表达水平； 结果： 1.通过收集临床确诊的PCOS患者及非PCOS患者的卵巢颗粒细胞样本，检测lncRNA SRA的表达情况，同时在PCOS小鼠模型中给予验证。我们发现lncRNA SRA在PCOS患者组中较对照组显著高表达（P＜0.001），在PCOS小鼠模型中lncRNA SAR表达亦显著升高（P＜0.01）； 2．在PCOS小鼠中发现了VEGF，ANGPT1的浓度显著高于对照组（P＜0.01），而ANGPT2，PDGFB和PDGFD则显著低于对照组（P＜0.01）；在PCOS小鼠中TNF-α，IL-1β和IL-6的水平显著升高（P＜0.01）；shRNA介导的lncRNA SRA下调后，sh-SRA组中VEGF，ANGPT1的浓度显著低于sh-NC组（P＜0.01），而sh-SRA组中ANGPT2，PDGFB和PDGFD则显著高于sh-NC组（P＜0.01）；较之sh-NC组，sh-SRA组中TNF-α，IL-1β和IL-6的水平显著减低（P＜0.01）。 3．CCK-8检测结果表明lncRNA SRA过表达使卵巢颗粒细胞的增殖能力明显提高（P＜0.001）。免疫印迹法表明SRA组Cyclin B，cyclin E和cyclin D1的表达水平较vector组升高（P＜0.01）。Hoechst染色评估细胞形态，SRA组与vector组细胞相比，细胞凋亡明显抑制。流式细胞术结果与Hoechst染色相似，过表达lncRNA SRA后，SRA组较vector组凋亡细胞的数量明显减少（P＜0.001）。在分子水平，过表达lncRNA SRA后，SRA组较vector组抗凋亡蛋白Bcl-2表达增加（P＜0.01），凋亡蛋白bax，cleaved-caspase3和cleaved-PARP的表达受到抑制（bax，P＜0.01；cleaved-caspase3，P＜0.001；cleaved-PARP，P＜0.01）。过表达lncRNA SRA后，SRA组较vector组E2和PG水平明显增加（E2，P＜0.01；PG，P＜0.001）。对比lncRNA SRA组和vector组，RT-PCR检测显示CYP19A1和CYP11A1（产生E2和PG的关键酶）表达水平也显著升高（CYP19A1，P＜0.05；CYP11A1，P＜0.01）。 4.与对照组比较，sh-NC组p-IκBα蛋白和胞核P65蛋白表达均增加（p-IκBα，P＜0.01；胞核P65，P＜0.01），对应的IκBα蛋白、胞浆P65蛋白表达均减少（IκBα，P＜0.01；胞浆P65，P＜0.01）。下调SRA后呈现相反的变化，与sh-NC组对比，sh-SRA组IκBα蛋白磷酸化降解被抑制，抑制P65蛋白入核，胞浆P65蛋白表达量增加（p-IκBα，P＜0.01；IκBα，P＜0.01；胞浆P65，P＜0.01；胞核P65，P＜0.01）； 5.给予NF-κB通路抑制剂PDTC后，过表达SRA的卵巢颗粒细胞中SRA的表达量显著下降（P＜0.001），小鼠颗粒细胞胞核中NF-κB p65蛋白水平有所下降；说明SRA过表达能够诱导NF-κB通路激活，抑制剂能够抑制SRA引起的该通路激活； 6.过表达lncRNA SRA后，小鼠颗粒细胞上清液中TNFα，IL-1β，IL-6含量较对照组升高（TNFα，P＜0.01；IL-1β，P＜0.001；IL-6，P＜0.01），给予抑制剂PDTC后，TNFα，IL-1β，IL-6含量均降低（TNFα，P＜0.05；IL-1β，P＜0.01；IL-6，P＜0.05）；小鼠颗粒细胞上清液中VEGF，ANGPT1，ANGPT2含量较对照组升高（VEGF，P＜0.01；ANGPT1，P＜0.001；ANGPT2，P＜0.05），PDGFB，PDGFD含量较对照组降低（PDGFB，P＜0.01；PDGFD，P＜0.01），给予抑制剂PDTC后，VEGF，ANGPT1含量降低（VEGF，P＜0.05；ANGPT1，P＜0.05）,ANGPT2，PDGFB，PDGFD含量变化无统计学差异。 结论： 1.首次在PCOS患者及PCOS模型小鼠靶器官（卵巢颗粒细胞）中检测到lncRNA SRA高表达。 2.在PCOS模型小鼠中，由shRNA介导下调lncRNA SRA表达时，可明显减轻PCOS小鼠的卵巢损伤程度，并抑制NF-κB信号通路异常激活。 3.LncRNA SRA高表达可能是PCOS的潜在危险因素，并可能通过NF-κB信号通路，调节卵巢组织血管生成和炎症反应，参与PCOS的病理过程。 本研究首次发现PCOS患者及PCOS模型小鼠卵巢颗粒细胞存在lncRNA SRA高表达，通过对血管生成及炎症反应相关因子表达水平的检测，及对卵巢颗粒细胞生物学功能的研究，探讨了lncRNA SRA影响PCOS的可能作用途径，并通过多种研究途径明确lncRNA SRA水平对NF-κB通路活化的影响，首次阐释了lncRNA SRA在PCOS发病机制中的作用，为PCOS新的治疗靶点研究提供了思路及理论基础。