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目的:用As2O3、STI571及二者联合分别干预小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0细胞从而观察其对多发性骨髓瘤(MM)细胞周期及细胞周期抑制蛋白P16的影响,进一步观察二者的疗效,初步探讨STI571对MM的可能机制,为As2O3、STI571二者联合应用于临床提供理论依据。方法:将受试对象分为九个组:对照组、1.0μmol/L As2O3组、2.0μmol/L As2O3组、10.0μmol/L STI571组、25.0μmol/L STI571组及联合用药组(As2O3+ STI571)1.0μmol/L +10.0μmol/ L、1.0μmol/L +25.0μmol/L、2.0μmol/L+10.0μmol/ L、2.0μmol/L +25.0μmol/ L,作用时间分为三个水平:24小时、48小时和72小时。用Western blot方法分别测定单药组和联合组不同时间点的细胞中P16蛋白表达情况,采用Adobe Photoshop 7.0软件对蛋白条带进行分析。用流式细胞仪对干预72小时的SP2/0细胞进一步进行细胞周期分析,以明确该蛋白具体影响细胞周期的哪个调控点。用MTT法测定不同浓度不同时间点作用后的细胞活力,观测SP2/0细胞生长是否受到抑制。结果(1)采用Adobe Photoshop 7.0软件分析结果显示:a、在空白对照组中,SP2/0细胞未显示P16蛋白带,提示未经药物处理时该细胞株不表达P16蛋白或表达量极少。b、在不同浓度As2O3、STI571单药组中SP2/0细胞中P16蛋白表达存在明显差异(P<0.05)c、As2O3与STI571两药有交互作用(P〈0.05),药物与时间也有交互作用(P〈0.05),As2O3 1.0μmol/L和STI571 25.0μmol/L作用72小时P16蛋白表达量最高。(2)流式细胞周期分析结果显示:As2O3、STI571使SP2/0细胞主要阻滞于G1期,S期细胞比例明显减少(P均〈0.05)。两药之间有交互作用(P<0.05),As2O31.0μmol/L和STI571 25.0μmol/L联合应用时作用最显著。(3)MTT结果显示:SP2/0细胞在各个时间点生长均受到抑制,其中以72小时为高峰。各单药组亦呈浓度效应关系,联合组抑制作用明显优于单药组,其中以As2O3 1.0μmol/L联合STI571 25.0μmol/L为抑制高峰。在不同时间点、不同药物浓度SP2/0细胞生长抑制率有显著差异(P〈0.05)。结论:(1)As2O3和STI571均有抑制骨髓瘤的作用,两药联用效果更佳。其可能机制是:二者共同激活或上调P16蛋白的表达,与CyclinD竞争结合CDK4,导致一系列的底物(如pRb)保持持续去磷酸化高活性,使SP2/0细胞周期停滞在G0/G1期,从而抑制肿瘤细胞的增殖。STI571、AS2O3对P16蛋白的这种调节作用有可能成为治疗骨髓瘤的有效途径。(2)骨髓瘤细胞中P16蛋白表达量增加可以抑制瘤细胞的增长。