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1目的熟三七是临床用常用饮片,其传统炮制方法为常压蒸制,耗时较长。为满足大生产需要,实现优质高效生产,本研究探索高压蒸制法制备熟三七规范化炮制工艺,并对炮制前后化学成分、主要药效进行对比研究。确定熟三七炮制工艺参数、明确生熟三七成分差异及补血活血药效差异,为熟三七生产和临床精准用药提供依据。2方法2.1熟三七炮制工艺研究以传统常压蒸制法制备熟三七的判断标准为评价依据,确定熟三七的外观性状及皂苷类成分含量。以此为参照标准,研究高压蒸制制备熟三七的工艺参数,考察蒸制温度和蒸制时间,确定高压蒸制熟三七的最佳炮制工艺。2.2生熟三七化学成分对比研究采用高效液相色谱法,对生熟三七中皂苷类成分、单糖类成分进行含量测定;采用紫外可见分光光度法,对生熟三七中多糖类成分含量进行测定。2.3生熟三七补血、活血药效对比研究将KM小鼠分为9组,分别为正常组、模型组、阳性药组、生三七混悬液组、生三七皂苷组、生三七多糖组、熟三七混悬液组、熟三七皂苷组、熟三七多糖组。以皮下注射乙酰苯肼造溶血性血虚小鼠模型,通过检测血常规,肝、脾病理切片,对比分析生熟三七补血药效差异。将SD大鼠分组同上,通过皮下注射盐酸肾上腺素注射液联合冰水浴,造急性血瘀大鼠模型,以全血切变率及血浆粘度为指标,对比分析生熟三七活血药效差异。3结果3.1熟三七炮制工艺研究三七常压蒸制15小时时达到传统标准,样品深棕色、完全透心,切片后无裂片;高压蒸制110℃蒸制3小时,样品外观性状达到传统标准,且皂苷类成分转化规律与常压蒸制15小时一致,确定熟三七高压蒸制炮制工艺为:110℃蒸制3小时。3.2生熟三七化学成分对比研究与生三七相比,熟三七新增了人参皂苷Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rg5等成分;而三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量显著降低,降低为原来的32.25%54.5%;人参皂苷Rd含量降低为原来的70.8%;人参皂苷Rc、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1含量增加为生三七的135.2%826.0%;新生成成分人参皂苷Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rg5总量为3.325%,占熟三七皂苷总和的37.1%。与生三七相比,熟三七中葡萄糖含量增加188.0%,果糖含量增加317.2%,麦芽糖含量减少为原来的40.5%。即炮制后,单糖(葡萄糖及果糖)含量均增加,双糖(麦芽糖)量降低。生三七多糖含量为9.264%,熟三七多糖含量为12.43%,熟三七中多糖含量高于生三七。可能高压蒸制后,利于熟三七多糖的溶出。3.3生熟三七补血、活血药效对比研究补血药效表明,与模型组相比,各给药组红细胞、血红蛋白明显升高(P<0.01),肝脏、脾脏中铁血黄素沉积、炎性细胞浸润现象均得到缓解,且熟三七各组优于生三七各对应剂量组。熟三七补血作用强弱为混悬液组>多糖部位组>皂苷部位组;活血药效表明,与模型组相比,各给药组全血切变率及血浆粘度均显著降低(P<0.01),且生三七各组优于熟三七各对应组。生三七组活血作用强弱为混悬液组>皂苷部位组>多糖部位组。4结论本实验通过研究确定了高压蒸制最佳工艺参数,可大大提高生产效率。蒸制前后,三七化学成分差异明显,熟三七中极性大的皂苷类成分含量降低,生成较多极性小的皂苷类成分;蒸制可促进多糖类成分溶出。炮制前后三七功效变化明显,在补血药效上,熟三七优于生三七,且熟三七全粉混悬液作用最强,其次为多糖部位;在活血药效上,生三七优于熟三七,且生三七全粉混悬液作用最强,其次为皂苷部位。结果提示生熟三七作用差异明显,口服给药时以传统打粉形式使用最佳。该研究为临床精准用药提供了参考依据。