GDNF(glial cell line-derived neurotrophic factor)是1993年被发现的对多巴胺能神经元有特异性营养作用的一种神经营养因子，结构特点显示其为TGF--β家族中的一个新的亚家族。自从GDNF被发现以后，众多学者对其进行了大量的研究，并取得了相当有意义的成果。迄今为止，GDNF的分子结构、基因定位及表达、生物学活性及其受体的有关情况均得到了深入的研究，动物模型已初步证实GDNF对于与神经元退变、损伤等有关的疾病有明确的治疗作用。有些学者对GDNF与某些肿瘤的关系进行了初步的探讨，如Wilms肿瘤、胰腺癌、白血病、甲状腺癌等。也有学者研究了GDNF在胶质瘤中的表达，发现其在胶质瘤中为过度表达，但未涉及GDNF在恶性程度不同的各级胶质瘤中的表达情况及意义。GDNF受体GDNFRα-1的研究则稍晚。许多学者在研究有关GDNF的作用机制问题发现GDNF要通过与其特异性的受体复合物(GDNFRα／RET)的结合后再激活某种信号传导途径发挥生物学功能。而GDNF是通过什么样的具体机制结合这两种不同的受体复合物组分，而后又激活了什么样的信号传导途径尚不十分清楚。要弄清这些问题，受体的研究是至关重要的。在研究GDNF的过程中，关于其受体的研——究山逐渐开展并逐步深入。到目前为止，这种最初发现是作为多巴胺能讪经元ifeR性营养因子的生物分子GD呷及其受体GD肝R a叫的研冗己经在许多方面取得了成果，也不再仅限于最初的神经营养作用。我们在本实验中则分别应用了原位杂交、兔疫组化及流式细胞仪的方法检测了GDNF及GDNFR aJ在正常脑组织和不同级别人脑胶质瘤（I－IV级）中的表达情况，发现了这两种因子与胶质瘤之间有意义的相互联系，同时也为进一步研究它们提供了新的有价值的线索。 第一部分实验应用原位杂交的技术分别检测了GDNFmRNA与GDNFRa4 在人脑胶质瘤中的表达，己知在基因表达为蛋白质的过程中，首先转录生成信使 RNA，然后由信使 RNA经翻译生成某一蛋白质“，我们设计了本实验并通过观察 GD地侧A与 GD地Ra斗mRNmRNA的表达分布情况从而从核酸水平初步推断这两种生物分子与人脑胶质瘤之间关系，并提示GDM与其受体在胶质瘤的发生与发展中的作用机制。首先用特异性探针与存在于正常脑组织与胶质瘤中的GDNF测A及 GDW a二 结合，应用兔疫酶法使探针／IDRNA杂交复合体显色，观察阳性杂交信号在正常脑组织Q0例）和人脑胶质瘤u9例）的分布情况。结果显示两种生物分子的阳性杂交信号在正常脑组织和胶质瘤细胞中均有出现，但肿瘤中的阳性率显著高干正常脑组织，各级胶质瘤之间阳性率也随肿瘤恶性程度的增加而增加O、11级之间差异不显著人我们由此结果可以推测 GDNF及 GDHa4有与胶质瘤同样的表达变化趋势。但在基因表达为蛋白质的过程中有诸多因素的参与，信使RNA不一定全部翻译为蛋白质，即 eA与翻译生成的蛋白质未必呈现完全平行的变化，那 GD地与 GDNFRQ1的表达是否也能体现这种随胶质瘤恶性程度的变化而变化的趋势呢？我们将在第二、三部分实 4一验卜I’旭过对存庄于正常脑组织与胶质瘤细胞中 GDNF与 GDNFR叫分子的直接检测与观察进一步证实这一推断。 第二部分实验采用SABC法，基于抗原抗体发生特异结合的免疫学原理，应用抗人体 GDW与 GDMR aJ的特异性抗体结合存在于胶质瘤细胞内的 GDMi与 GDNFR a八蛋白，再应用敏感的标记抗体结合第一抗体，同样用免疫酶法进行显色，光镜下观察显色后的抗原抗体复合物在正常脑组织标本和人脑胶质瘤标本中各自不同的表达情况。结果发现了抗原抗体复合物在正常脑组织和人脑胶质瘤中有明显不同的表达。在胶质瘤中表达的总阳性率明显高子正常脑组织，这与iesenhofer的研究是符合的。在各级胶质瘤之间也有不同的表达，恶性程度越高，则观察到的抗原抗体复合物的表达阳性率越高，各级之间存在明显差异（二、fi级之间差异不显著）。此结果与原位杂交的实验结果相符合。 原位杂交和免疫组化虽然所采用的原理和技术方法不同，但两者在数据的采集和处理方面有不足之处，即都是在光镜下对所形成的核酸杂交体或抗原抗体复合物进行肉眼的直接观察，并采取了一个绝对的、两极化的标准来区分阳性细胞和阴性细胞（非阳即阴），虽然在经过数据的转化后，使用了阳性细胞数占所有细胞数的比率即阳性率这一量化的数据进行统计学分析，但仍是一个半定量的检测方法。而流式细胞仪作为一种近年来得到高度发展和广泛应用的细胞自动分析技术，则是应用激光激发标记于抗人GDW及GDN’FRa刁多克隆抗体上的荧光素oITC）后，便其发出绿色荧光，光学转换后再经计算机处理而得到每个细胞的信息参数（荧光指数人这样的处理方法是一种更精确的定量分析。应用流式细胞仪厌CM）得到的结果与前两部分实验一致。 5—— 对三邮分实验中所得两蛋白实验数据进行直线俐关分析，00＊F