【摘 要】
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目的:探究miRNA-31高表达对于小鼠在脊髓损伤后的脊髓水肿方面,是否能起到促进改善的作用,以期为SCI后的脊髓水肿的机制研究和临床治疗,提供更好的帮助。方法:（1）使用提取小鼠尾部组织DNA并进行体外PCR反应和琼脂糖凝胶电泳的方法,对miRNA-31高表达转基因小鼠是否阳性表达进行鉴定,将阳性小鼠用于后续实验,并与野生型FVB小鼠形成对照。（2）将miRNA-31转基因阳性小鼠和野生型FVB
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目的:探究miRNA-31高表达对于小鼠在脊髓损伤后的脊髓水肿方面,是否能起到促进改善的作用,以期为SCI后的脊髓水肿的机制研究和临床治疗,提供更好的帮助。方法:（1）使用提取小鼠尾部组织DNA并进行体外PCR反应和琼脂糖凝胶电泳的方法,对miRNA-31高表达转基因小鼠是否阳性表达进行鉴定,将阳性小鼠用于后续实验,并与野生型FVB小鼠形成对照。（2）将miRNA-31转基因阳性小鼠和野生型FVB小鼠随机分为正常组、假手术组（不损伤脊髓）和脊髓损伤组。对正常组小鼠不做任何特殊处理;假手术组小鼠通过手术操作仅打开椎板,暴露出目标位置脊髓,不进行脊髓损伤操作;脊髓损伤组小鼠通过手术操作打开椎板,暴露出目标位置脊髓,并使用脊髓损伤打击仪对脊髓进行打击;其中对于假手术组和脊髓损伤组小鼠,又可分为术后1、3、7、14、21天组。对每组小鼠进行脊髓组织含水量测定,观察其含水量变化,根据实验结果,开展后续实验。（3）根据脊髓含水量变化,选取miRNA-31转基因阳性小鼠和FVB小鼠正常组以及SCI组术后1、3、7、14天组进行Western Blot实验,检测目的蛋白AQP-4表达水平,并通过Evans Blue染液检测小鼠的血脊髓屏障通透性,观察AQP-4蛋白表达水平和血脊髓屏障通透性的变化情况。结果:（1）在选取的75只miRNA-31转基因小鼠中,经鉴定,有70只小鼠为转基因阳性小鼠,阳性率到93.3%,可用于开展后续实验。（2）通过检测脊髓含水量,发现miRNA-31小鼠和FVB小鼠在正常组和假手术组的脊髓含水量一致,无差异。脊髓损伤后1天含水量最高,对于miRNA-31小鼠,脊髓损伤后1、3天的脊髓含水量多于正常组的含水量（P<0.05）,脊髓损伤后7、14、21天的含水量少于损伤后1天的含水量（P<0.05）,与正常含水量相比无差异。对于FVB小鼠,脊髓损伤后1、3、7天的脊髓含水量多于正常组的含水量（P<0.05）,脊髓损伤后14、21天的含水量少于损伤后1天的含水量（P<0.05）,与正常含水量相比无差异。（3）通过Western Blot发现脊髓损伤后1天,AQP-4蛋白水平均升高,术后3、7、14天,均降低,并且在术后3、7天时,miRNA-31小鼠比FVB小鼠的AQP-4蛋白水平下降更多（P<0.05）。通过Evans Blue染液对血脊髓屏障通透性检测,发现对于miRNA-31小鼠和FVB小鼠,在正常组当中,其血脊髓屏障通透性均低,为正常水平,在脊髓损伤后1、3天,血脊髓屏障通透性均有所增加,对于miRNA-31小鼠,能够在脊髓损伤后7天时,使血脊髓屏障通透性下降至接近正常水平,而FVB小鼠在脊髓损伤后7天时,其血脊髓屏障通透性与正常水平相比还较高,要在脊髓损伤后14天时,恢复正常水平。结论:（1）本次鉴定miRNA-31小鼠的阳性率达到93.3%,阳性率较高,鉴定出来的miRNA-31小鼠可用于开展后续实验。（2）miRNA-31高表达有利于促进脊髓损伤后脊髓含水量下降,减轻脊髓水肿。在脊髓损伤后21天时,脊髓水肿基本消失,脊髓含水量与正常时的含水量基本一致。（3）miRNA-31高表达可以促进脊髓损伤后恢复期AQP-4蛋白水平的下降,同时促进血脊髓屏障通透性的降低,两者可能共同促进了脊髓损伤后脊髓含水量的减少,促进脊髓水肿减轻。
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