目的:喉癌的发生、发展与多种癌调节基因及信号转导通路的改变有关,其中促红细胞生成素产生肝细胞受体(Eph受体)与癌细胞增殖、发展有关;Hox基因作为细胞增殖分化的正性和负性调节基因,不仅调控胚胎细胞的增殖和分化,而且也是成人组织细胞增殖和分化的重要调节基因。若Hox基因发生异常表达,就会导致个体发育和组织器官形成过程中出现异常的形态结构,并可致细胞恶性转化形成肿瘤。C-myc基因属于核蛋白类调控基因,其在细胞周期变化、细胞的生长代谢、基因的不稳定性、刺激血管生成、细胞恶性转化、分化及凋亡中起重要的调节作用。EphA2的表达受到许多基因的调控,如ras、p53及HoxA1、HoxB1均能上调EphA2基因的表达,而雌激素和C-myc癌基因可以负性调控EphA2基因的表达。本研究从蛋白水平探讨HoxA1、C-myc、EphA2与喉癌发生发展的关系,试从分子生物学角度探讨喉癌的发病机制。方法:1. 40例喉癌组织及40例癌旁组织(距肿瘤切缘至少0.5cm)取自2007年1月至2008年12月于河北医科大学第四医院耳鼻咽喉-头颈外科住院手术的喉癌患者,取15例非喉癌患者的喉部正常粘膜组织做对照。所有肿瘤组织均经病理学确诊为鳞状细胞癌,癌旁组织及喉部正常粘膜均经病理证实为炎症或正常粘膜。2.应用流式细胞术检测喉癌组织、癌旁组织及喉部正常粘膜组织的EphA2和HoxA1、C-myc蛋白表达的含量。基因蛋白以荧光指数(FI)作为定量分析指标,以FI>1.0为阳性表达,FI≤1.0为阴性表达。3.采用免疫组化方法检测喉癌组织及喉部正常粘膜组织中EphA2和HoxA1、C-myc蛋白的表达情况。EphA2蛋白阳性定位于细胞质和细胞膜,HoxA1蛋白阳性定位于细胞质,按染色强度和阳性细胞百分率评分:总分=0为阴性,总分<3为弱阳性,3≤总分<6为阳性,总分≥6为强阳性。C-myc蛋白阳性定位于细胞质和细胞核,按染色强度和阳性细胞百分率评分:总分小于1为阴性,总分1-2为弱阳性,总分3-4为阳性,总分大于4为强阳性。4.应用统计软件spss11.5 for windows进行数据分析,以P≤0.05为差异在统计学上有显著性意义,P≤0.01为差异在统计学上有非常显著性意义。结果:流式细胞术1 EphA2蛋白在喉癌组织中的表达量(FI=1.4877)和阳性表达率(77.5%)分别高于癌旁组织(1.2178,55%)和正常喉粘膜组织(0.9999,40%),(P<0.05) (χ2=4.528,P=0.033);(P<0.05) (χ2=5.369,P=0.021);癌旁组织和正常喉粘膜组织间的表达差异无统计学意义。在喉癌组织中,EphA2蛋白在淋巴结转移(N+)组的表达量(1.8264)和阳性表达率(100%)分别高于无淋巴结转移(N0)组(1.3592,67.9%),(P=0.002) (Fisher’s精确概率计算,P=0.037);临床Ⅲ、Ⅳ期组的表达量(1.6757)和阳性表达率(91.7%)分别高于临床Ⅰ、Ⅱ期组(1.2579,56.3%),(P=0.002) (Fisher’s精确概率计算,P=0.018);病理组织学G1、G2、G3组的表达量和阳性表达率分别为(1.3871,72.4%),(1.7675,85.7%),(1.8110,100%),G3组的表达量明显高于G1组(P<0.05),G1、G2组和G2、G3组的表达量差异无统计学意义,三组间阳性表达率差异无统计学意义。EphA2蛋白在不同临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄的表达量和阳性表达率差异均无统计学意义。2 HoxA1蛋白在喉癌组织中的表达量(FI=1.1810)和阳性表达率(90%)分别高于癌旁组织(0.9743,27.5%)和正常喉粘膜组织(0.9999,26.7%),(P<0.05) (χ2=32.2373,P<0.005);(P<0.05) (χ2=21.9841,P<0.005);癌旁组织和正常喉粘膜组织间的表达差异无统计学意义。在喉癌组织中,Hoxa1蛋白在淋巴结转移(N+)组的表达量(1.1823)与无淋巴结转移(N0)组(1.1250)比较,差异无统计学意义,阳性表达率(91.7%、89.3%)差异无统计学意义;临床Ⅲ、Ⅳ期组的表达量(1.2014)与临床Ⅰ、Ⅱ期组(1.1582)比较,差异无统计学意义;临床Ⅲ、Ⅳ期组的阳性表达率(100%)高于临床Ⅰ、Ⅱ期组(75%)(Fisher’s精确概率计算,P=0.02);病理组织学G1、G2、G3组的表达量和阳性表达率差异无统计学意义。HoxA1蛋白在不同临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄的表达量和阳性表达率差异均无统计学意义。3 C-myc蛋白在喉癌组织中的表达量(FI=1.1741)和阳性表达率(72.5%)分别高于癌旁组织(0.9895,45%)和正常喉粘膜组织(1.0000,40%),(P<0.05) (χ2 =6.240,P=0.012);(P<0.05) (χ2=4.979,P=0.026);癌旁组织和正常喉粘膜组织间的表达差异无统计学意义。在淋巴结转移(N+)组的喉癌组织中C-myc表达量(1.1125)低于无淋巴结转移(N0)组(1.2136) (t=2.681,P=0.011),淋巴结转移(N+)组的阳性表达率(41.7%)低于淋巴结转移(N0)组的阳性表达率(85.7%) (Fisher’s精确概率计算,P=0.008)。临床Ⅰ、Ⅱ期组的喉癌组织中C-myc表达量(1.1663)和阳性表达率(68.8%)与临床Ⅲ、Ⅳ期组(1.1713,75%)相比,差异无统计学意义。病理组织学G1、G2、G3组的表达量和阳性表达率分别为(1.1676,75.9%),(1.1914,71.4%),(1.2051,50%),三组间阳性表达率差异无统计学意义。C-myc蛋白在不同临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄的表达量和阳性表达率差异均无统计学意义。4喉癌组织中EphA2蛋白与HoxA1蛋白、C-myc蛋白有多元线性回归关系,EphA2蛋白与HoxA1蛋白呈正相关,与C-myc蛋白呈负相关Y=0.983+0.739X1-0.323X2(P=0.000)。免疫组化1 EphA2蛋白在喉癌组织中的异常表达率(80%)与正常喉粘膜组织的异常表达率(40%)相比有非常显著性差异(P=0.008)。喉癌组织中EphA2的异常表达率高于正常喉粘膜组织。EphA2在伴有淋巴结转移的喉癌中异常表达率与无淋巴结转移的喉癌的异常表达率无统计学差异。EphA2在小于或等于3厘米的喉癌中异常表达率与大于3厘米的喉癌的异常表达率无统计学差异。2 HoxA1蛋白在喉癌组织中的异常表达率(82.5%)与正常喉粘膜组织的异常表达率(33.3%)相比有非常显著性差异(P=0.001)。喉癌组织中HoxA1的异常表达率高于正常喉粘膜组织。HoxA1在有淋巴结转移的喉癌中异常表达率与无淋巴结转移的喉癌中异常表达率无统计学差异(P=0.081)。HoxA1在Ⅲ、Ⅳ期组喉癌中异常表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期组(P=0.011)。HoxA1在小于或等于3厘米的喉癌中异常表达率与大于3厘米的喉癌中异常表达率无统计学差异。3 C-myc蛋白在喉癌组织中的异常表达率(77.5%)高于正常喉粘膜组织的异常表达率(20%)(P=0.000)。C-myc在有淋巴结转移的喉癌中异常表达率低于无淋巴结转移的喉癌组织(P=0.012)。C-myc在Ⅰ、Ⅱ期喉癌中异常表达率与Ⅲ、Ⅳ期喉癌中异常表达率无统计学差异。C-myc在小于或等于3厘米的喉癌中异常表达率与大于3厘米的喉癌中异常表达率无统计学差异。4 EphA2在喉癌中异常表达率为80%。HoxA1在喉癌中异常表达率为82.5%。C-myc在喉癌中异常表达率为77.5%。应用Spearman等级相关分析,喉癌中EphA2的异常表达与HoxA1的异常表达呈正相关(rs=0.420, P=0.007),喉癌中EphA2的异常表达与C-myc的异常表达呈负相关(rs=-0.395, P=0.012)。结论:1 EphA2蛋白和HoxA1蛋白、C-myc蛋白在喉癌组织、癌旁组织及正常喉粘膜组织中均有表达。2 EphA2蛋白和HoxA1蛋白、C-myc蛋白在喉癌组织中的定量及定性表达均高于正常喉粘膜组织。3 EphA2蛋白在喉癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期、病理分级有相关性;与临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关。HoxA1蛋白在喉癌组织中的表达与临床分期有相关性;与淋巴结转移、病理分级、临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄无关。C-myc蛋白在喉癌组织中的表达与淋巴结转移有相关性;与临床分期、病理分级、临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄无关。4 EphA2蛋白和HoxA1蛋白、C-myc蛋白在喉癌组织中的表达有相关性,EphA2蛋白与HoxA1蛋白呈正相关,与C-myc蛋白呈负相关。5 EphA2蛋白和HoxA1蛋白、C-myc蛋白在喉癌中的表达可能与喉癌的发生、发展有关。