前交叉韧带-骨（ACL-to-Bone）界面组织包括四种不同的组织区域：韧带，非矿化的界面组织，矿化的界面组织，和骨。不同的组织区域含有不同的材料成分和细胞。在韧带区域，成纤维细胞处于由胶原Ⅰ和胶原Ⅲ组成的基质中，而非矿化的界面组织区域，卵圆型的软骨细胞处于由胶原Ⅱ和蛋白聚糖组成的区域。矿化的界面组织含有肥大的软骨细胞。软骨下骨是由成骨细胞、骨细胞和破骨细胞及胶原Ⅰ基质组成。界面组织工程需要梯度的支架材料和可分化为不同类型细胞的种子细胞。梯度生物材料在化学组成、结构、力学和生物分子等各种特征中具有各向异性。梯度生物材料已经成为生物医学领域特别是组织工程中必不可少的研究热点。目前，各种各样天然或合成的生物材料已被用于制备组织支架材料，并且被广泛应用于各领域。水凝胶具有设计灵活、水合性、粘性等特性，能很好的模仿体内ECM性质，是界面组织工程理想的材料。在界面组织修复和再生过程中，细胞在不同区域行使不同的功能，因此细胞的选择非常重要。来自肌腱组织的成体干细胞-肌腱干细胞除具有干细胞的通性，还具有增殖速度快、能高效向软组织细胞分化的能力，是界面组织工程种子细胞的理想选择。本课题主要包括制备磷酸盐梯度的胶原材料、肌腱干细胞的分离和鉴定、磷酸盐梯度的胶原材料的生物相容性。主要方法与结果如下：①鼠尾胶原Ⅰ的提取、纯化和鉴定：依醋酸提取法制备鼠尾胶原初提物，盐析、半透膜纯化、冷冻干燥得到银白色蓬松状鼠尾胶原。采用SDS-PAGE凝胶电泳考马斯亮蓝染色法、红外光谱分析（FITR）鉴定确定所得为高纯度鼠尾胶原Ⅰ。②磷酸盐鼠尾胶原梯度材料的制备：采用梯度溶液矿化法制备磷酸盐梯度胶原材料。扫描电镜分析可知，磷酸钙混合物与鼠尾胶原Ⅰ结合，有明显界面差异，上层磷酸钙混合物沉淀颗粒较少，而下层较多。③磷酸盐鼠尾胶原梯度材料与大鼠生物相容性分析：以SD大鼠为移植载体，HE染色分析材料降解属性，DAPI染色考察材料细胞浸润。结果可知：梯度材料移植两周后没有完全降解，大量细胞浸入材料内部。④肌腱干细胞（TSPCs）的分离、培养、鉴定：取SD大鼠跟腱组织，Ⅰ型胶原酶消化、选取克隆团，经三向分化、流式细胞术检测干细胞表面标志物，确定该细胞为肌腱干细胞。⑤磷酸盐鼠尾胶原梯度材料肌腱干细胞相容性分析：将肌腱干细胞种植于磷酸盐鼠尾胶原梯度材料中，两周内取时间点DAPI染色观察，肌腱干细胞在材料内生长良好。综上所述，制备的磷酸盐鼠尾胶原梯度材料具有特异的微细结构、良好的生物相容性。分离得到的肌腱干细胞（TSPCs）结合上述梯度材料可为界面组织工程进一步研究提供研究基础与参考。