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第一部分自身免疫糖尿病患者外周血CD4+T细胞DNA总体甲基化异常的研究目的研究自身免疫糖尿病患者外周血CD4+T细胞DNA总体甲基化状态,从而探讨自身免疫糖尿病患者的表观遗传学改变。方法密度梯度离心法分离20例经典1型糖尿病患者、15例成人隐匿性自身免疫糖尿病患者和19例正常对照的外周血单个核细胞,磁珠法分选CD4+T细胞,抽提DNA,然后用总体甲基化定量试剂盒检测两组自身免疫糖尿病患者和正常对照CD4+T细胞的DNA总体甲基化水平。结果与正常对照组相比,经典1型糖尿病患者CD4+T细胞基因组DNA总体甲基化水平增高(P=0.047)；成人隐匿性自身免疫糖尿病患者CD4+T细胞基因组DNA总体甲基化水平较正常对照组相比也增高(P=0.046)。结论自身免疫糖尿病患者外周血CD4+T细胞DNA呈现总体高甲基化水平。第二部分自身免疫糖尿病患者外周血CD4+T细胞甲基化相关调控基因表达的研究目的研究自身免疫糖尿病患者外周血CD4+T细胞DNA甲基转移酶(DNMT)(?)甲基结合蛋白(MBD)的表达水平。方法密度梯度离心法分离20例经典1型糖尿病患者、15例成人隐匿性自身免疫糖尿病患者和19例正常对照的外周血单个核细胞,磁珠法分选CD4+T细胞,抽提总RNA,逆转录为cDNA,实时定量聚合酶链反应检测DNA甲基转移酶(DNMT)和甲基结合蛋白(MBD)的mRNA表达。结果与正常对照相比,经典1型糖尿病患者CD4+T细胞DNMT3b的mRNA水平明显增高(P=0.038),MBD1mRNA表达水平明显降低(P=0.042)；成人隐匿性自身免疫糖尿病患者CD4+T细胞DNMT3b的mRNA水平也明显增高(P=0.040),MBD的mRNA水平无明显差异。同时,经典1型糖尿病患者CD4+T细胞DNA总体甲基化水平与DNMT3b mRNA表达水平呈正相关(r=0.567,P=0.009)。成人隐匿性自身免疫糖尿病患者的DNA总体甲基化水平也与DNMT3b mRNA表达水平呈正相关(r=0.422,P=0.032)。结论自身免疫糖尿病患者CD4+T细胞DNA甲基化相关调控基因表达异常,与自身免疫糖尿病患者CD4+T细胞DNA总体甲基化异常状态相关。第三部分自身免疫糖尿病患者外周血CD4+T细胞自身免疫反应相关基因表达及其调节序列甲基化状态的研究目的研究自身免疫糖尿病患者外周血CD4+T细胞自身免疫反应相关基因表达及其调节序列的甲基化状态。方法密度梯度离心法分离20例经典1型糖尿病患者、15例成人隐匿性自身免疫糖尿病患者和19例正常对照的外周血单个核细胞,磁珠法分选CD4+T细胞,抽提总RNA,逆转录为cDNA,实时定量聚合酶链反应检测Foxp3、ICOS、CTLA-4、IFNG、IL10、IL2、IL17和IL4的mRNA表达水平；流式细胞检测外周血单个核细胞中CDlla及CD40L在CD4+T细胞中的表达水平；western-blot检测Foxp3蛋白表达水平；亚硫酸氢钠测序检测Foxp3基因调节序列的甲基化状态。结果与正常对照组相比,经典1型糖尿病患者外周血CD4+T细胞Foxp3表达下降,且其基因调节序列呈明显的高甲基化(P=0.046)；成人隐匿性自身免疫糖尿病患者CD4+T细胞Foxp3表达也降低,其基因调节序列亦呈明显的高甲基化(P=0.047)。结论自身免疫糖尿病患者外周血CD4+T细胞Foxp3表达降低与其基因调节序列的高甲基化相关。