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龙牙楤木和三七都是五加科重要药用植物,龙牙楤木中香树素合酶基因0β-AS)及三七鲨烯合酶基因(PnSS)都是三萜皂苷类物质合成过程中的关键酶基因。本文将龙牙楤木β-AS基因与三七PSS基因分别转入烟草与龙牙楤木中,利用qRT-PCR方法检测转基因烟草及龙牙楤木中4种关键酶基因(FPS、SS、SE、β-AS)和龙牙楤木中PnS基因的相对表达量,利用高效液相分析方法检测转基因龙牙楤木愈伤与体胚中角鲨烯和齐墩果酸的含量,并探究了 MeJA处理对转基因楤木体胚皂苷合成4种关键酶基因相对表达量与角鲨烯和齐墩果酸含量的影响。具体结果如下:1.构建龙牙楤木β-AS基因植物表达载体,获得12个转基因烟草株系,检测4种关键酶基因的相对表达量,结果显示转基因烟草4种酶基因的相对表达量显著高于野生型,其中株系16、17相对表达量显著高于其它株系;株系16的FPS、SS基因的相对表达量最高;株系17的SE、β-AS基因的相对表达量最高。2.将三七SS基因转入龙牙楤木中,得到6个转基因龙牙楤木胚性愈伤组织系与6个体胚苗系,检测了转基因株系中4种关键酶基因的相对表达量。转基因愈伤组织系中,下列无性系中关键酶基因的表达量都显著高于野生型及其他无性系:7和21号无性系中PnSS基因、2和11号无性系中FPS基因;7号无性系中SE基因、11和12号无性系中的β-AS基因。转基因体胚中下列无性系中的关键酶基因相对表达量都高于野生型及其他无性系:7和21号中PnSS基因、7号中SE基因、7和25号中β-AS基因。3.检测转基因龙牙楤木愈伤与体胚中角鲨烯与齐墩果酸的含量显示:转基因愈伤组织与体胚无性系中角鲨烯含量显著高于野生型,转基因愈伤组织系与体胚系中齐墩果酸含量显著低于野生型,转基因体胚系中角鲨烯与齐墩果酸均高于转基因愈伤组织系。4.利用200 μmol/L MeJA处理转基因龙牙楤木体胚1、3、5 d,结果显示处理1 d转基因与野生型体胚生长量显著高于其他处理,其中转基因体胚系21、25生长量显著高于其它无性系及对照。5.检测上述MeJA处理的转基因体胚无性系中4种关键酶基因的表达情况。结果显示:处理1d时,11、12、21、25号中的FPS基因相对表达量较高;未处理所有株系中的β-AS基因相对表达量显著高于处理的;处理1 d时,转基因体胚系中SE、SS、PnSS基因相对表达量显著高于其他处理,其中21号中SE、S基因的相对表达量显著高于其它无性系。6.检测处理后转基因体胚中角鲨烯和齐墩果酸的含量,结果显示,转基因无性系7、21中角鲨烯含量显著高于其它无性系及对照,转基因无性系21齐墩果酸含量在处理1 d时显著高于其它无性系及对照。