本文从促红细胞生成素（EPO）出发,经过动物免疫,多克隆抗体的制备以及不同的检测抗体的制备等一系列过程,初步建立了一种灵敏检测抗原EPO的方法,从而为简洁、经济、快速的体外检测兴奋剂EPO打下一定的基础。 通过对ELISA方法最佳条件的选择,我们确定了ELISA实验中的最佳底物为TMB以及酶标抗体的适用浓度,确立了比较稳定的用于抗原抗体检测的不同类型的ELISA实验流程。 从抗原EPO出发,通过免疫动物、制备抗血清以及血清的纯化、效价的测定等等一系列步骤,获得了比较可行的免疫不同动物的方案。结合硫酸铵沉淀和层析的方法确立了一种多克隆抗体制备较为简洁的实验流程,获得了高浓度、高效价的纯度较高的抗EPO的多克隆抗体。所制备抗体的效价是报道的多克隆抗体效价的十倍左右。 通过比较HRP酶标记抗体和生物素标记抗体等不同的标记抗体的方法初步认定:HRP酶标记抗体的制备条件比较难控制一些,不但由于酶自身的交联很容易形成大分子,而且在后续的检测中非特异性吸附相当高。而生物素标记抗体因为操作方便,所以对抗体的损伤也较小,而且用于后续的检测中有很高的抗体活性以及很强的特异性。 应用双抗体夹心ELISA方法,以制备的多克隆抗体作为捕捉抗体,用制备的生物素化抗体作检测抗体,然后用不同的发光系统检测抗原EPO。认为10ng以下有较好的线性关系,最低检出量为1ng(2×10^-8g/mL)。与已报到的文献中用单克隆抗体作捕捉抗体的检测水平相当,但是人人简化了抗体制备工艺,同时大幅度降低了检测成本。