氨基糖苷类抗生素是一类高效、广谱抗生素，在治疗由革兰氏菌引起的感染方面具有许多优点，其在动物中广泛应用的一个主要后果就是在肉、奶、蛋等动物性食品中这些抗生素的非法残留。本研究采用蛋白质工程技术对卡那霉素钝化酶之一氨基糖苷3-O磷酰基转移酶Ⅱa进行改造，建立了一种不同于已往报道过的抗生素残留检测方法，其主要工作包括一下几个方面： 通过PCR方法从质粒pEGFP-N1上获得了氨基糖苷3-O磷酰基转移酶Ⅱa(APH(3)-Ⅱa)基因并克隆至表达载体pT7473(pT7473/APH)。采用PCR重叠延伸法对aph(3)-Ⅱa基因的第190、208位氨基酸Asp分别进行突变，构建了两个突变体(pT7473/D190A，pT7473/D208G)，此外还同时对这两个位点进行突变构建了一个双突变体(pT7473/D190AD208G)。构建的野生型和突变体基因分别在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达，表达的蛋白既有以可溶性形式存在的，也有以包涵体形式存在的。取可溶性部分进行Ni-NTA亲和层析，获得纯度在95﹪左右的目的蛋白。 分别用戊二醛一步法、二步法和过碘酸钠法制备了辣根过氧化物酶与卡那霉素等抗生素的酶标物。用直接ELISA的方法测定了酶标物的效价，Westernblot和免疫斑点实验证明了HRP标记的卡那霉素和其它抗生素与APH(3)-Ⅱa能够结合。 用纯化的APH(3)-Ⅱa包被聚苯乙烯板，以未标记的抗生素、酶标抗生素共同竞争包被在聚苯乙烯板上APH的结合位点，进行了一系列竞争性ELISA实验，通过优化反应条件，建立了一种利用抗生素钝化酶进行残留检测的方法。实验中发现采用戊二醛二步法标记的效果相对一步法和过碘酸钠法较好，通过该方法可以检测到卡那霉素的最低残留量为1ug/mL。