黄海葵毒素多肽的分离纯化及功能鉴定

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黄海葵(Anthopleura xanthogrammica)是舟山海域常见的一种小型海葵,自古以来就作为一味中药,具有收敛固涩、祛湿杀虫的功效。黄海葵体表以及触手中含有刺细胞,内含海葵毒素,海葵毒素具有多种特殊的生理活性,一直以来是生物毒素研究的重要内容。为了解黄海葵刺细胞中海葵毒素的分子组成和特性,采用多维高效液相色谱结合动物实验,对黄海葵毒素多肽的分子组成以及代表性毒素分子开展了结构与功能研究。通过反复冻融法获得黄海葵粗毒液。利用多维高效液相色谱手段结合动物实验,从黄海葵粗毒中筛选了多种具有强杀虫活性以及低哺乳动物活性的杀虫肽,其分子量约在25kD之间,在100μg/kg体重浓度下对水白虾以及黄粉虫幼虫具有强且快速的麻痹、致死活性,对小鼠毒性较弱。这表明黄海葵毒素是一种开发生物杀虫剂的资源宝库。海葵毒素中通常含有一种能加强肌肉收缩的兴奋性毒素,通过反相高效液相色谱法结合质谱分析,从黄海葵粗毒中分离到一种由48个氨基酸组成的新型多肽类毒素,命名为AX-1。该毒素分子分子量为5018.2Da,序列中含有6个半胱氨酸,推测形成3对二硫键;三维结构模拟表明AX-1的空间结构类似于经典的海葵毒素Ap-A,以反平行β-折叠片以及α-螺旋结构为主,属于典型的二硫键稳定的α/β结构;膜片钳研究表明,AX-1能显著抑制大鼠背根神经节细胞的钠离子通道的失活并显著增加钠离子通道的电流。上述研究结果表明,AX-1是一种兴奋性多肽毒素,通过抑制钠离子通道的失活而增强肌肉的收缩能力,因此可作为一种潜在的强心肽药物。海葵毒素中通常含有一类分子量在20kD左右的溶细胞素,对真核细胞具有较强的细胞毒性,也是一类潜在的抗肿瘤药物。为研究黄海葵毒素是否具有溶细胞素以及其对肿瘤细胞凋亡诱导作用的可能机制,通过分子量分级分离,将黄海葵粗毒预分为分子量10kD以上和10kD以下两个组分,结合细胞毒性实验,我们发现,海葵毒素相对分子质量10kD以上的组分中含有能抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡作用的成分,其对人肺癌细胞A549,人肺癌小细胞H446,和人脐内静脉细胞半致死浓度分别为53.24μg/mL,15.19μg/mL和69.71μg/mL。其对人肺癌小细胞的半致死浓度较正常人脐内静脉细胞要低4倍,这表明黄海葵毒素中分子量在10kD以上的组分中含有潜在的抗肿瘤药物。
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