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TGF-β家族是一类多肽细胞生长因子,参与调控许多的生物学过程。如细胞增殖,分化,运动,凋亡等。研究TGF-β家族的信号通路以及这些通路的调控机制,不但对阐明细胞生物学的许多未知现象有着重要意义,对于肿瘤的发病机理的研究以及治疗药物的开发也都有着理论指导作用。对TGF-βl的细胞生物学作用和信号通路发面的研究已经开展很久,但它对离子通道表达的调控还较少有报道过,PKC在TGF-βl调控基因表达中的作用也未见深入研究的结果。
实验室先前的研究表明,TGF-βl可以诱导血管成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,在此过程中诱导一种A型钾离子通道的表达。依此为依据来研究TGF-β信号通路。
利用电压钳的全细胞记录方式,在SD大鼠胸主动脉上分离培养的成纤维细胞中记录钾电流。发现lgM蛋白激酶C(PKC)的激动剂PMA与20ngTGF-β1对成纤维细胞有相似的作用:都能诱导一种新的瞬时激活钾离子通道出现。同时,定量RT-PCR实验结果也证实两者都能引起Kv42基因表达上调。而PKC的特异性阻断剂BisindolylmaleimideI能够去除TGF-βl对Kv42基因的作用。所以认为,在TGF-βl诱导血管成纤维细胞转化过程中,PKC参与了对IA钾离子通道的表达调控。
TGF-β信号通路主要是由细胞内一类Smad家族蛋白来介导的,而现在越来越多的生化和发育方面的证据表明TGF-β信号通路也可以通过非Smad依赖的方式进行。利用RNA干扰的方法,分别阻断细胞内Smad2,Smad3表达,发现TGF-131诱导后,依然可以记录到IA钾离子电流。所以初步得出结论,在TGF-β1诱导血管成纤维细胞转化过程中,可能是通过非Smad依赖的途径,来调控IA钾离子通道的表达。
4-AP是A型钾离子通道的特异阻断剂。较其他类型钾通道阻断剂,它对TGF-β1诱导后的成纤维细胞的迁移活性有更强的抑制作用。提示A型钾通道电流对肌成纤维细胞的迁移更为重要。