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玫烟色虫草(Cordyceps fumosorosea)是对烟粉虱(Bemisia tabaci)重要的昆虫病原真菌。烟粉虱是世界范围内危害农林植物的主要害虫,具有危害性强、繁殖力强等特点。近年来有研究发现玫烟色虫草芽生孢子与分生孢子同样能侵染烟粉虱,并且液体发酵生产比固液发酵更具经济性。本文利用前期研究筛选得到的烟粉虱高毒力菌株玫烟色虫草Ifu04菌株,通室内生物测定研究玫烟色虫草芽生孢子的毒力水平,并通过耐热性试验确定芽生孢子与分生孢子的耐热性差异,同时通过液体发酵工艺研究,优化液体发酵培养基配方及培养温度、接种量等最优发酵条件。取得的主要研究结果如下:通过对玫烟色虫草Ifu04菌株芽生孢子形成过程的显微观察,发现在接入分生孢子悬浮液24小时后,开始产生芽生孢子,在96h达到芽生孢子的产生高峰;芽生孢子比分生孢子更大,大小为5-10μm,并且呈细长棒状。两种孢子的萌发试验发现,芽生孢子在培养2h就有2%的萌发,在培养第4h时,达到43.6%,而且此时分生孢子的萌发率仍然为0,玫烟色虫草的芽生孢子萌发速度显著快于分生孢子;在培养24h后,两种孢子的萌发率均达到97%以上,彼此间差异不显著。耐热性试验发现,玫烟色虫草的分生孢子和芽生孢子在50℃水浴10 min,孢子萌发率均保持在90%以上,两者间没有显著差异;水浴40min时,分生孢子的萌发率仍维持在60.6%,而芽生孢子已降至14.6%;水浴60min,两种孢子的萌发率都降为0。芽生孢子50℃下的耐热性显著低于分生孢子。30℃水浴加热60min,分生孢子萌发率从99%下降到91%,芽生孢子萌发率从99%下降到87%,两种孢子萌发率没有显著性差异。生物测定结果显示,在温度25±1℃,RH(95±5)%,在5种接种浓度下,生物测定前三d芽生孢子对烟粉虱二龄若虫的累计死亡率均显著高于分生孢子处理组;第4d时,1.0×107孢子/ml接种浓度下,两种孢子对烟粉虱的累计死亡率差异已不显著,而1.0×105孢子/ml接种浓度下,到第6d两种孢子的差异才不显著。1.0×107孢子/ml接种浓度下,玫烟色虫草分生孢子和芽生孢子在第6d时对二龄若虫的累计致死率分别达到82%和81%,两者无显著差异,均表现了对烟粉虱的良好控制效果;在此接种浓度下,分生孢子和芽生孢子对烟粉虱二龄若虫的LT50分别为4.3d和3.9d,LC50分别为1.52×105和1.03×105孢子/ml。玫烟色虫草芽生孢子都比分生孢子有着更高的毒力水平。玫烟色虫草芽生孢子的液体发酵工艺研究中发现,氮源对芽生孢子的产生有着直接影响,其中酵母粉为最优氮源,其芽生孢子的产孢量最高,可达6.8×107孢子/ml,最佳的氮源添加量为35g/L,此时芽生孢子产量可达7.6×107孢子/ml;液体发酵的最佳碳源为萄葡糖,在添加量为80g/L时,芽生孢子产量可达7×107孢子/ml。玫烟色虫草的液体发酵温度对芽生孢子的产生有着显著影响,其发酵的适宜温度为25℃,此温度下玫烟色虫草芽生孢子的产量显著高于20℃和30℃下的产孢量。玫烟色虫草液体发酵时的初始接种量对芽生孢子的发酵曲线有着显著影响,初始接种量越小,芽生孢子产生的增量越显著;但初始接种量越大,液体发酵产生的芽生孢子越快达到较高的浓度;当初始培养基分生孢子浓度分别为1×104孢子/ml和1×107孢子/ml时,经过3d液体发酵后的芽生孢子产生数量分别为9.3×106孢子/ml和7.4×107孢子/ml。液体发酵体系中的装液量直接影响到培养过程中的氧气供应量,在液体培养基装液量为50ml时,发酵第3d时,芽生孢子的产生数量为8.3×107孢子/ml,是200ml装液量的59.28倍,显示出玫烟色虫草芽生孢子的产生过程需要较高的氧气含量。因此,玫烟色虫草Ifu04菌株的最优液体发酵工艺为:酵母粉为氮源,添加量为35g/L,葡萄糖为碳源,添加量为80g/L;液体发酵温度为25℃,初始培养基分生孢子浓度为1×105孢子/ml,液体培养基装液量为50ml。本研究确定了玫烟色虫草芽生孢子在重大害虫烟粉虱防治上的潜力,液体发酵工艺的研究为产品开发与产业化利用打下理论研究基础。