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副黏病毒是在人和动物中广泛存在的一类病毒,其中的一些成员可以引起人和动物的严重发病,造成严重的公共卫生事件及重大的经济损失。2013年,在黑龙江省开展的野鸟中禽流感病毒的监测中,我们在大兴安岭及绥棱两个地区的野鸟样品中发现了3个有血凝活性,却不含禽流感和新城疫病毒的样品,为鉴定这些样品中可能存在的病原,我们开展了以下实验:首先,收集3个样品尿囊液及利用差速离心法处理后,分别取出100μL制备电子显微镜负染色样品并在电镜下观察。在这3个样品中均观察到副黏病毒样粒子:直径为150~200 nm,有囊膜且可见线性核酸。随后,分别提取了这些样品的核酸,利用随机引物对其进行扩增并测序,分析结果显示3个样品均含与禽2型副黏病毒基因组片段有较高的相似性(71~92%)的基因片段,表明3个样品中所含的病毒粒子与禽2型副黏病毒存在同源性。为进一步鉴定这些病毒,我们将3个样品并分别与NDV和APMV-2多克隆抗体进行血凝抑制试验,结果表明NDV阳性血清对3个病毒有低的抑制活性(23)而APMV-2多克隆抗体对3个抗原物质有较高的血凝抑制活性(29)。通过以上实验,我们初步鉴定这3株病毒为禽2型副黏病毒,并分别命名为APMV-2/Emberiza spodocephala/China/Daxing’anling/974/2013(APMV-2/Daxing’anling/974),APMV-2/Procarduelis nipalensis/China/Suiling/53/2013(APMV-2/Suiling/53),及APMV-2/Anthus ruf ulus/China/Suiling/106/2013(APMV-2/Suiling/106)。由于我国还没有有关野鸟中禽2型副黏病毒的报道,我们对这3株病毒的全基因组进行了测定。根据Gen Bank中下载的2型副黏病毒的基因组序列及随机扩增的结果,设计了对这3株病毒全基因组测序的引物,对其基因组序列进行了测定。测序结果表明3株病毒基因组序列全长均为15000 nt,按照5’-N-P-M-F-HN-L-3’顺序编码六个非重叠基因,基因组全长遵循“六拷贝原则”。这3株分离株的全基因组序列与其他禽2型副黏病毒的基因组序列相似性为75.8~80.2%,与APMV-2/Bangor相似性最高,基因3’端存在55 nt leader,5’端存在161 nt的trailer。3株病毒的P基因均存在m RNA编辑位点“A5G4”,通过m RNA编辑时在编辑位点G序列中插入1个G产生V蛋白或插入2个G从而产生W蛋白。三株病毒的N、P、M、F、L基因与其它6株2型副黏病毒(NK、F8、Yucaipa、England、Kenya、Bangor)的相应基因相似性最高的是Bangor,而HN基因相似性最高的是Kenya。将这3株病毒全基因组与本科中其它属代表毒株全基因组进行进化树分析显示此3株病毒与其它已知的6株病毒在进化上处于同一分支。为评估这3株病毒的致病性,我们选择APMV-2/Suiling/53进行了动物试验。经测定APMV-2/Suiling/53的鸡胚平均致死时间(MDT)为120 h,其脑内致病指数(ICPI)为零;SPF鸡和小鼠的感染试验表明,APMV-2/Suiling/53对SPF鸡呈低致病力而对BALB/c小鼠无致病性。本实验通过形态学观察、核酸分析与血凝抑制试验鉴定了3株禽2型副黏病毒,并对其全基因组和致病性进行了初步分析。研究结果为禽副黏病毒遗传多样性及致病性研究提供了基础资料。