背景:前列腺癌是男性泌尿系统中常见的肿瘤,也是全球男性中第二大最常见的癌症。以往报道中,前列腺癌在欧美男性中发病率较高,但近几年,前列腺癌在我国男性中的发病率也呈现上升趋势。前列腺癌的发生与许多基因改变相关,其中最常见的体细胞突变基因是SPOP。癌症的发生常常伴随着基因突变,而基因突变又会导致基因组的不稳定,因此探究SPOP突变如何影响前列腺癌基因组稳定性至关重要。目的:1.探究SPOP S119位点突变对于前列腺癌基因组稳定性的影响。2.探究SPOP S119位点突变对前列腺癌放疗敏感性的影响。3.探究SPOP S119位点突变对于小鼠成瘤的影响以及放疗敏感性的影响。方法:体外结合实验和体外激酶实验证明SPOP S119位点是ATM磷酸化位点;免疫共沉淀实验证明在电离辐射诱导下,ATM磷酸化SPOP S119位点;利用CRISPR Cas9技术构建前列腺癌PC3 S119N和S119A点突变细胞系;Western Bloting检测电离辐射后突变型与野生型细胞系γH2Ax形成情况,比较不同组的细胞对于DNA损伤修复的能力;通过流式细胞仪分析突变型和野生型细胞系有丝分裂指数和核微核化形成情况,比较不同组细胞周期检查点是否异常;MTT和克隆形成实验检测不同组放疗敏感性;蛋白质谱检测SPOP突变后相互作用蛋白的改变:采用Cre-loxp系统构建SPOP-(flox-S119A)条件性基因敲除小鼠,MEF实验获取杂合小鼠细胞进行基因型鉴定并将MEF细胞永生化,免疫荧光实验检测MEF细胞基因组稳定性以及放疗敏感性。结果:1.在电离辐射诱导下,SPOP与ATM相互作用,且ATM磷酸化SPOP位点在S119位。2.SPOP S119位点突变后DNA损伤修复延迟。3.SPOP S119位点突变,导致细胞周期检查G2/M期异常。4.SPOP S119位点突变导致染色体畸变,细胞核微核化增加。5.SPOP S119位点突变,导致细胞对于放疗敏感性增加。6.SPOP S119位点突变,MEF细胞DNA损伤修复延迟。结论:SPOP S119位点突变使得前列腺癌基因组不稳定性增加和放疗敏感性增加。