目的溺死(death by drowning或drowning)是机械性窒息死亡的一种,溺死的法医学鉴定一直都是科研、检案的重点、难点问题。当前,在法医实践中,硅藻检验仍然是溺死诊断的”金标准(golden standard)"。近年来,对溺死的相关报道大多为不同水域(鱼塘、池塘、库、河流、泳池水等)溺死案件的鉴定或回顾性研究,且只着重于尸体脏器硅藻的检出,而忽略溺液硅藻浓度对检测结果的影响,不同地域溺死案件脏器硅藻检验的定性、定量亦无统一的诊断参考标准,而2008年中华人民共和国公安部发布的行业标准《人体组织器官中硅藻硝酸破机法检验》(GA/T8132008)中对此也未“明确”表述,特别是硅藻计数方法尤其存在不严谨、缺乏科学性的“问题”。因此,本课题的研究重点是通过实验探索建立一种简单、快速、科学、严谨的硅藻滴片计数方法,进一步完善硅藻检验鉴定溺死的量化标准,为法医学溺死案件硅藻检验的定性、定量检测提供技术支持。此外,由于各水域环境复杂迥异,而硅藻种类繁多、形态迥异,不同水源的硅藻种属构成亦不相同。因此,本实验通过对滇池水域水样的检测应证本技术方法的可靠性和真实性,为滇池水域溺死案件死亡原因诊断提供帮助。方法通过实验建立“三区四象二野”硅藻滴片计数方法：吸取20微升不同硅藻浓度溺液滴于载玻片上,自然阴干后形成直径约7毫米的圆斑,以圆斑圆心为中点,将圆斑等分为3个同心圆区,即中心区、中间区、边缘区。计数时将圆斑以“十”字划分成四个象限,分别于各区、各象限按中心区、中间区、边缘区等距离点各取2个高倍视野计数,共得24个高倍视野硅藻计数值(同时,取12个视野、48个视野计数对比),相加后取平均值即得该溺液的高倍视野(×40)硅藻浓度数,数值精确到小数点后两位。同时,采用公安部《人体组织器官中硅藻硝酸破机法检验》所提供的方法计数硅藻,结果作为对照。结果1.12个视野、24个视野及48个视野进行两两比较：12个视野与24个视野比较p<0.05,差异有统计学意义；12个视野与48个视野比较p<0.05,差异有统计学意义；24个视野与48个视野比较p>0.05,差异无统计学意义。2.将溺液直接制成滴片与将溺液先浓缩再还原后制成的滴片(经过一次离心)进行比较,一次离心会造成硅藻损失,损失量为10%左右。3.使用“三区四象二野法”计数硅藻,当溺液硅藻浓度低于2548个/每毫升或浓度高于36162个/每毫升时,实际测得数值与理论数值之间存在明显偏差。4.对6组未知水样分别按倍比法稀释和浓缩,并使用“三区四象二野法”法计数硅藻,如果实际测得数值与理论数值之间不存在偏差,则认为测定结果真实可信。那么,6组水样中,2倍浓度结果可信出现的次数最多,出现5次；4倍浓度、8倍浓度次之,均出现4次。5.对云南省非溺死人体尸体肺中硅藻含量用“三区四象二野法”进行检测,肺消化液涂片中未检出硅藻。6.“三区四象二野法”硅藻计数方法与公安部《人体组织器官中硅藻硝酸破机法检验》(GA/T813—-2008)法计数方法比较,计数更简便、可行、便于操作、计数方法容易掌握等优点,更能体现科学性和严谨性。结论1.使用光学显微镜高倍视野(×40)观察计数硅藻,采用的“三区四象二野法”能较好地检测硅藻数量和浓度,较之公安部《人体组织器官中硅藻硝酸破机法检验》(GA/T813—-2008)法计数硅藻更具相对的科学性和有可信性。其方法具有简便、可行、便于操作、容易掌握等优点。2.“三区四象二野法”计数硅藻的可信区间为2548-36162(个/每毫升)之间。3.用“三区四象二野法”对未知水样的检测,一般将之浓缩后再检测较易检出硅藻,其最佳浓缩范围在2-8倍之间。4.非溺死人体肺脏中未检测出硅藻,通过空气、食物及水等途径进入人体的硅藻未对本次实验结果产生影响。5.水样每进行一次离心,都会造成硅藻损失,损失量为10%左右,实际操作中要尽量减少离心次数。6.昆明市自来水中未检测出硅藻。