【摘 要】
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为了利用信号肽引导抗菌肽B基因的分泌表达,通过PCR定点突变技术改造抗菌肽B基因,去掉5端的ATG,在基因两端加上相应限制性酶切位点,从而使改造过的抗菌肽B基因能够准确地插入
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为了利用信号肽引导抗菌肽B基因的分泌表达,通过PCR定点突变技术改造抗菌肽B基因,去掉5端的ATG,在基因两端加上相应限制性酶切位点,从而使改造过的抗菌肽B基因能够准确地插入杆状病毒转移载体(pAcGP67B)中的信号肽克隆位点上而不改变它们的阅读框架.改造完毕的抗菌肽B基因克隆入pBluescript M13-中测序鉴定后,从测序载体上切下目换片段克隆到pAcGP67B中的信号肽克隆位点上,确定克隆成功后取重组转移载体质粒与野生AcNPV-DNA共转染Sf9细胞,经空斑筛选PCR检测后获得一株重组病毒.重组病毒在Sf9细胞中扩增并表达抗菌肽B基因,取含表达产物的细胞培养液检测其生物活性表明:改造过的抗菌肽B基因在Sf9细胞中获得初步表达,且表达的分泌型产物对Escherichia coliK<,12>D<,31>有抑菌活性.
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