自然界中，生物体不断地遭受到外界微生物的侵袭，但机体能够抵抗感染，表明机体具有完善的防御系统对外界病原感染或受伤做出应答反应。人们曾一度认为，动物通过其体液免疫和(或)细胞免疫体系来抵御感染，然而事实表明该免疫体系并不能被迅速触发而使动物免遭病菌侵袭。近十几年来，随着对抗菌肽研究的深入，逐渐显示了其在动物先天防御体系中具有重要作用。它们是机体免疫系统中对抗外界感染的第一道防线，具有广谱的抗细菌、真菌、病毒、原虫和肿瘤细胞的活性，其杀菌机理也与传统抗生素完全不同，从而显示了它在医学、农业等有关学科具有独特的研究潜力。 目前对抗菌肽的研究大多数集中在昆虫上，而对哺乳动物的研究相对较少。此外，这些研究主要集中在活体上，对离体细胞抗菌肽的报道为数不多，在国内则几乎没有这方面的报道。本文正是从这一新颖的角度出发，从离体细胞中诱导抗菌肽，从而建立一个体外快速诱导筛选抗菌肽的技术平台。 实验选取三种离体培养的昆虫细胞系：粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)卵细胞系BTI-Tn-581(简称581或Hi5)、斜纹夜蛾(spodoptera litufa)卵细胞系SL(简称SL)、草地贪夜蛾(Spodoptera Frugiperda)卵细胞系Sf9；六种哺乳动物细胞系：猪肺泡巨噬细胞系MarC-145、仔猪肾上皮传代细胞系IBRS-2、仔猪肾上皮传代细胞系PK-15、乳仓鼠肾上皮传代细胞系BHK-21、人胚胎肾上皮细胞系293、非洲绿猴肾细胞系Vero；两种肿瘤细胞系：人子宫颈癌细胞系Hela、人肝癌细胞系SSMC-7721，用热灭活的大肠杆菌DH5a诱导上述离体细胞产生抗菌肽，结果如下： 1．选取Hi5、Vero和PK-15三种细胞测定诱导时间与细胞产生的抗菌肽活力关系，研究发现诱导时间不同，细胞上清液的抗菌活性不同。诱导4h后细胞上清液开始出现抑菌活性，随着时间延长，抗菌活力上升，Hi5细胞和PK-15细胞20h左右达到最大值，Vero细胞24h左右达到最大值，再延长时间，抗菌活力明显下降，36h后恢复到对照水平甚至比对照更低。 2.选取Hi5、Vero、PK-15三种细胞测定诱导物浓度与细胞上清液抗菌肽活力的关系，结果发现不同浓度的细菌诱导细胞产生的抗菌肽活性不同，不同细胞的最佳诱导浓度也不一样。其中Hi5细胞的最佳诱导量为1500 bacteria／cell，Vero细胞的最佳诱导量为1000 bacteria／cell，PK细胞的最佳诱导量为2000 bacteria／cell。但在1000-2000 bacteria／cell的范围内，细胞上清液抗菌活性差别不大，高于或低于这个浓度，诱导上清液抗菌活性下降。当细菌浓度高于4000 bacteria／cell时，诱导上清抗菌液活性非常低。 3.选取了6种细菌和5种真菌(其中包括三种昆虫病原菌)测定昆虫抗菌肽的抗菌谱，测定结果表明，昆虫抗菌肽对细菌尤其是革兰氏阴性菌、真菌都有一定的抑制作用，但对昆虫病原菌未观察到明显的效果。 4.各种细胞诱导产物的抗菌活性检测发现，Hi5、Sf9、Vero、293、PK-15、IBRS-2细胞的诱导产物均有不同程度的抗菌活性，而MarC-145、BHK-21、7721、Hela细胞的诱导产物则几乎没有抗菌活性，并从哺乳动物细胞中筛选出了一株能够诱导产生较高活性的抗菌肽的细胞系。 5.Tricine SDS-PAGE电泳分析表明Vero细胞诱导样品比对照样品多出5条电泳带，其分子量依次为15.1KD、10.7KD、8.1KD、7.6KD和6.2KD；293细胞的诱导样品比对照样品多出2条电泳带，其分子量为8.1KD和7.6KD：PK细胞的诱导样品比对照样品多出1条电泳带，其分子量为7.0KD，同时比对照缺少了分子量为5.9KD和5.4KD的两条电泳带；Hi5和IB细胞的诱导样品比对照样品多出分子量为7.6KD的一条电泳带；Sf9细胞的诱导样品也比对照样品多出一条分子量为6.5KD的电泳带。由该结果我们可以推测，抑菌活性物质可能由上述差异带引起。 本实验为筛选产生高活性抗菌肽的细胞株提供了良好的依据，从而为解决大多数抗菌肽活性低而不能投入生产这一难题创造了有利条件。