【摘 要】
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目的:体外培养小鼠MIN-6细胞,进行分组干预,明确血管紧张素(1-7)对高糖应力下胰岛β细胞去分化的影响,为糖尿病治疗提供新思路。方法:在紫外线消毒30分钟的超净工作台,将MIN-6小鼠胰岛细胞吸入至提前配置好的完全培养基3ml(10%胎牛血清、1%青链霉素双抗溶液、89%RPMI-1640基础培养基混匀配置),吹打均匀后放于25T培养瓶,最后放置37℃,5%CO_2细胞培养箱中孵化,24小时换
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目的:体外培养小鼠MIN-6细胞,进行分组干预,明确血管紧张素（1-7）对高糖应力下胰岛β细胞去分化的影响,为糖尿病治疗提供新思路。方法:在紫外线消毒30分钟的超净工作台,将MIN-6小鼠胰岛细胞吸入至提前配置好的完全培养基3ml（10%胎牛血清、1%青链霉素双抗溶液、89%RPMI-1640基础培养基混匀配置）,吹打均匀后放于25T培养瓶,最后放置37℃,5%CO2细胞培养箱中孵化,24小时换液,显微镜下观察细胞生长状态,细胞贴壁均匀生长至70%-80%可进行传代,传至第5代时进行实验具体操作。将悬浮的MIN-6细胞均匀分布于6孔板中,分别标记A、B、C、D组,分别为实验对照组、高糖组、高糖+Ang-（1-7）组、高糖+Ang-（1-7）+Mas受体阻断剂A779组,共同培养24小时,重复3次上述操作。用细胞免疫荧光法检测各组MIN-6成熟β细胞表面标志物PDX-1蛋白以及去分化后祖细胞表面标志物Oct4、Nanog蛋白表达。结果:1.细胞形态:显微镜下观察,正常对照组中的MIN-6细胞,呈瓦片状,贴壁均匀生长;高糖组可见悬浮细胞,贴壁细胞分布不均匀,且形态不一,皱缩变圆;Ang（1-7）干预组与高糖组比较,细胞内未见明显漂浮细胞,贴壁生长且形态介于对照组和高糖组之间;Ang（1-7）受体阻断剂A779干预后,瓶中可见大量悬浮细胞,贴壁细胞明显减少,且分布不均匀,皱缩变圆,形态不一。2.高糖干预后的MIN-6细胞,免疫荧光检测结果显示:小鼠胰岛MIN-6成熟β细胞表面标志基因PDX-1蛋白表达减少,而祖细胞表面标志基因Oct4、Nango蛋白表达增加,表明高糖应激下成熟MIN-6细胞向内分泌祖细胞转化。与高糖组比较,Ang（1-7）干预后,成熟β细胞表面标志基因PDX-1蛋白表达增加,而祖细胞表面标志基因Oct4、Nango蛋白表达减少,表明Ang（1-7）干预,使去分化后的祖细胞再次分化为成熟β细胞。Ang（1-7）受体阻滞剂A779干预后,β细胞与祖细胞的表面标志物与高糖组大致一致。结论:实验表明高糖应力下的小鼠MIN-6细胞,给予血管紧张素（1-7）干预,减弱成熟MIN-6细胞分化至内分泌祖细胞的能力,改善糖尿病进程。
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