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自2017年以来,华东三省(山东、安徽和江苏)陆续出现了一种以樱桃谷鸭为感染对象的,全身羽毛部分或全部脱落,屠宰后羽根难以拔除(毛刺鸭)的临床疾病,暂称为“脱羽综合征”(Feathers Shedding Syndrome,FSS)。该病在2019年临床危害尤为严重,发病鸭以樱桃谷肉鸭为主,发病鸭场该病的发病率为3%-70%。发病鸭主要表现为生长迟缓,采食率下将,羽毛脱落越来越严重;部分鸭群会出现死亡,死亡率不等,给肉鸭养殖户造成巨大损失。因鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)和新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus-related virus,NGPV)感染可能导致相似的临床症状,本研究建立了可同时检测DuCV-1、DuCV-2和NGPV的三重PCR方法,并对山东、安徽和江苏三省采集的脱羽鸭的羽毛囊和各种器官进行了检测,在此基础上对临床病料中的6株DuCV和6株NGPV毒株进行了全基因组扩增和序列分析,并通过动物试验来探讨此病发生的原因,以期为养鸭行业对FSS疾病的科学防控提供了参考依据。本研究分为四个部分:1、检测DuCV-1、DuCV-2和NGPV的三重PCR方法的构建根据DuCV-1、DuCV-2和NGPV的保守序列,应用Oligo7.0软件设计了五条引物,建立了能一步检测DuCV-1、DuCV-2和NGPV的三重PCR方法。该方法特异性好,灵敏度高,对于DuCV-1最低检测浓度为50 copies/μL,DuCV-2的最低检测浓度为50copies/μL,NGPV的最低检测浓度为5×10~3copies/μL。2、FSS鸭流行情况调查分析2018年8月到2019年6月从山东、安徽和江苏等地的27个表现有FSS症状的樱桃谷鸭养殖场采集了540只(每个场采集20只)发病鸭的羽毛囊和540份各种内脏器官(每种各60份),运用建立的三重PCR检测方法进行了病毒检测。统计结果表明羽毛囊中DuCV的检出率为78.89%(426/540),NGPV的检出率为82.78%(447/540),混合感染为70.00%(378/540),并发现在4-5周龄的病鸭混合感染更严重。对内脏器官的检测结果表明,所有器官均能检出DuCV和NGPV,其中心脏的DuCV和NGPV的检出率最高,分别为88.33%(53/60)和84.91%(51/60),脑组织的检测阳性率均最低,21.67%(13/60)和15%(9/60)。对DuCV和NGPV病毒载量检测表明,法氏囊中DuCV的含毒量最高,心脏中NGPV的含毒量最高,羽毛囊中DuCV和NGPV的含毒量都较高,肺脏均为最低。根据我们的临床检测结果可知,FSS病鸭中DuCV和NGPV的含毒量分布几乎一致,二者显示出相同的组织嗜性。3、DuCV和NGPV的全基因组测序和分析根据NCBI上已登录的DuCV和NGPV的全基因组序列分别设计出相应的引物对6株DuCV(DuCV-1和DuCV-2各三株)和6株NGPV进行全基因组扩增,并利用Megline7.0软件进行进化树的构建以及对主要蛋白和基因进行对比分析。结果表明:本研究扩增出的6株DuCV序列与NCBI上已登录的DuCV序列并没有明显差别,DuCV-1的同源性为93.4%-98.5%,DuCV-2的同源性为96.9%-98.7%;6株NGPV位于同一个小的分支中,与NGPV其他毒株的同源性为98.1%-98.8%,与GPV的同源性为91.0%-95.6%。DuCV Rep蛋白没有共同的突变位点,而Cap蛋白中DuCV-1分支只有一个共同突变位点,DuCV-2分支有6个共同的突变位点;NGPV的ITR区域中,有6处核苷酸共同突变,其中包括两处碱基增加;Rep蛋白和Cap蛋白中,分别有7处和10处的核苷酸变异导致了其氨基酸发生变异;同时,对Cap蛋白中的VP3蛋白进行了相应的二级结构和三级结构的预测,并对一些氨基酸变异位点进一步分析。4、动物攻毒试验将166只1日龄大小的健康樱桃谷雏鸭随机分为四组:对照组(16只)、NGPV单独感染组、DuCV单独感染组和NGPV与DuCV共感染组,每组50只。分别在7 DPI、14DPI、21 DPI、28 DPI、35 DPI以及42 DPI,每组分别随机取8只鸭,采集内脏器官和羽毛囊进行病毒载量比较;单独在每个时期采集16只鸭的羽毛囊对病毒的阳性率进行统计记录;同时取3只羽毛囊检测为阳性的鸭分析不同时期羽毛囊中病毒的载量变化。研究发现,混合感染组鸭的临床脱羽症状最为严重;不同时间点各组攻毒鸭羽毛囊中均可以测出攻毒病毒的存在,且随着日龄的增加羽毛囊中病毒的阳性检测率也随之升高;共感染组中DuCV和NGPV的感染率和病毒载量均比单一感染组高,且在21DPI时达到顶峰;对每个检测时间点内脏器官与羽毛囊的病毒载量进行综合分析发现,DuCV和NGPV在攻毒鸭的内脏器官和羽毛囊具有相似的组织嗜性和复制规律。本研究通过临床检测数据和动物攻毒试验数据综合分析,初步推断DuCV和NGPV的共感染可能是FSS产生的根本原因。