茉莉酸途径抑制油菜素甾醇途径调控水稻免疫水稻黑条矮缩病毒的作用机制研究

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植物激素在植物免疫反应过程中具有重要作用,然而植物激素与水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)互作的报道却很少。本研究对健康叶片和感染RBSDV病叶进行高通量测序分析病毒侵染后寄主基因组表达谱的变化,筛选与病毒侵染相关的激素途径。采用超高效液相-三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS)检测病毒侵染后寄主内源性激素浓度。运用外源性激素和水稻突变体研究各激素途径在RBSDV侵染水稻过程中的作用。具体结果如下:1.高通量测序结果表明在RBSDV侵染后,很多寄主防御和应激相关基因上调表达。Real time quantitative PCR(RT-qPCR)对部分基因进行验证,结果显示被检测的10个PR基因和11个应激相关转录因子在病毒侵染30和60d时都显著性上调表达。2.高通量测序和RT-qPCR结果显示茉莉酸(Jasmonic acid,JA)合成途径相关基因在病毒侵染后显著性上调表达。JA应答标志性基因JiOsPR10在病毒侵染30和60 d时都显著性上调表达。UPLC-MS/MS检测结果表明感病水稻内源性JA浓度升高,为健康水稻的4.1倍。外源性MeJA处理水稻后RBSDV发病率显著性低于对照(0.1%Triton X-100)处理的水稻。JA受体OsCOI1-RNAi突变体coi1-13的病毒发病率及感病植株中RBSDV外壳蛋白mRNA的表达量都显著性高于野生型对照组。这些结果表明JA途径在水稻抵抗RBSDV侵染过程中发挥正调控作用。3.高通量测序结果分析发现油菜素甾醇(brassinosteroids,BR)合成途径相关基因在RBSDV侵染后下调表达。RT-qPCR实验结果显示BR合成途径和信号途径相关基因在病毒侵染30和60 d时显著性下调表达。UPLC-MS/MS检测结果表明感病水稻内源性油菜素甾酮(castasterone,CS)浓度显著性下降,为健康水稻的0.45倍。外源性表油菜素内酯(epibrassinolide,BL)处理水稻后RBSDV发病率显著性高于对照(0.1%Triton X-100)处理的水稻,而BR途径抑制剂芸苔素唑(brassinazole,BRZ)处理水稻后其病毒发病率显著性低于对照处理的水稻。OsGSK2过表达突变体Go的病毒发病率及感病植株中RBSDV外壳蛋白mRNA的表达量都显著性低于对照植株中花11(Zh11)。这些结果表明激活BR途径有利于RBSDV侵染水稻。4.MeJA和BL混合液处理组RBSDV发病率显著性低于对照组。MeJA处理野生型水稻6和12h时,JA途径相关基因上调表达而BR途径相关基因下调表达。这表明水稻中激活JA途径后能够抑制BR合成和信号途径相关基因表达。在MeJA处理12 h时,对照日本晴的BR合成和信号途径相关基因显著性下调表达,而突变体coi1-13未发生显著性差异变化。这些结果表明水稻中激活后的JA途径抑制BR合成和信号途径相关基因表达受到OsCO/1受体的调控。综上所述,本研究结果表明防御和应激相关基因及JA途径相关基因在病毒侵染后上调表达而BR途径相关基因下调表达。在RBSDV侵染水稻过程中,JA途径是抗病性途径而BR途径是感病性途径。受体OsC9/1调控JA途径诱导的寄主抗病性抑制BR途径诱导的寄主感病性。
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