葛根素对大鼠缺血性随意皮瓣存活的影响及其机制研究

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背景:随意皮瓣移植术是骨科中常用的创面修复方法。随意皮瓣远端坏死是临床中常见问题之一,主要原因是其缺少轴型血管。当随意皮瓣长宽比大于1.5-2:1时,其远端常因血供不足出现部分甚至全部坏死。葛根素具有抑制组织局部炎症反应、减少组织缺血再灌注损伤、抗氧化应激反应、改善局部微循环、促进组织血管再生等作用。本研究旨在探讨葛根素对大鼠缺血性随意皮瓣存活的影响及其机制。方法:选取36只体重范围为280-320 g健康雄性SD大鼠,将其随机分成三个组,低剂量组(葛根素剂量设置为50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)和生理盐水对照组(同等体积生理盐水),每组大鼠数量为12只。采用改良的麦克法兰皮瓣模型造模,在每只大鼠背部中间设计一个3 cm×9 cm的皮瓣,术后每天定期给药并观察皮瓣存活情况。术后7天采血及取材。记录并计算皮瓣存活面积及存活率;苏木素&伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色观察皮瓣组织中中性粒细胞浸润及微血管生成情况;蛋白印迹(Western Blot,WB)检测炎症因子如肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况;实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)检测大鼠皮瓣组织中VEGF、IL-6和TNF-α的m RNA表达情况;丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性测定结果来检测氧化应激情况;采用酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中VEGF、TNF-α和IL-6水平,全自动生化分析仪检测血中C-反应蛋白(C-Reactive protein,CRP)水平。结果:术后第7天,高剂量组皮瓣存活率明显高于低剂量组,低剂量组皮瓣存活率明显高于对照组。低剂量组与高剂量组新生的微血管数量明显高于对照组,其中高剂量组新生微血管数量最多;各组均有大量中性粒细胞浸润,其中对照组浸润情况最明显,低剂量组次之,高剂量组浸润情况最轻。与对照组相比,葛根素组尤其是高剂量组,皮瓣组织内VEGF、VEGF m RNA表达、SOD活性、血清中VEGF的含量均高于对照组。葛根素组尤其是高剂量组,皮瓣组织中IL-6、TNF-α、MDA含量及血清中CRP、IL-6、TNF-α水平显著降低。结论:葛根素可促进SD大鼠缺血性随意皮瓣的存活,其中高剂量组效果较低剂量组促进效果明显。葛根素可以通过促进微血管生成、改善局部微循环、抑制炎症反应、减少氧化应激反应、减少缺血再灌注损伤等作用促进大鼠皮瓣存活。
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