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目的：研究补肾填精法对原发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency, POI)患者抗苗勒氏管激素(anti-mullerian homone, AMH)水平的影响。探讨补肾填精法对POI的治疗作用。研究补肾填精法对POI小鼠AMH信号转导通路(AMH/ALK2/Smad1)的影响,探讨补肾填精法治疗POI的作用机制。方法：临床研究：收集2014.3～2014.12在广州中医药大学第一附属医院妇科门诊就诊、符合POI诊断标准的患者80例,年龄范围为22～39岁,平均年龄为30岁。根据患者血清FSH水平分为4组：A组(10IU/L<FSH≤20IU/L)、B组(20IU/L<FSH≤30IU/L)、C组(30IU/L<FSH≤40IU/L)、D组(FSH>40IU/L),每组各20例,包括中药组10例,中西药组10例,中药组采用补肾填精法治疗,以左归丸为基本方加减,中西药组采用补肾填精法加雌孕激素序贯疗法(补佳乐1mg×21天,qd,于第12天加服黄体酮胶丸100mg,bid×10天)。中药组、中西药组均治疗6个月。采用症状评分观察患者月经及全身症状的改善情况,用电化学发光法检测血清AMH、FSH水平的变化。同时选取年龄在21～39岁的女性健康志愿者20名作为正常组。实验研究：选取BALB/C 8周龄的雌性小鼠40只,随机分为模型组、左归丸组、补佳乐组、空白对照组。另取12月龄BALB/C雌性小鼠9只设为老年组。用含0.03mg小鼠透明带3多肽(ZP3)的溶液0.15m1注射小鼠双后脚掌皮下及腹腔,建立POI动物模型。造模成功后,药物组分别用左归丸2.7g/(Kg·d)、补佳乐0.15mg/(Kg·d)进行灌胃,模型组及空白对照组均予同等量的蒸馏水。连续灌胃4周,每周休息一天。取小鼠血清及卵巢组织,HE染色法观察小鼠卵泡生长情况,电化学发光法检测小鼠血清AMH、FSH的水平,免疫组化法及Westen blot法检测AMH、ALK2,Smad1蛋白在卵巢组织中的表达。结果：(1)随着年龄增长,正常育龄期女性血清AMH水平逐渐下降,而FSH水平逐渐上升。(2)治疗后,POI患者月经过少、后期、先后不定期、闭经的情况得到明显改善,治疗的总有效率为75%,其中补肾填精法治疗的有效率为72.5%,A组、B组、C组、D组分别为80%、70%、80%、60%,说明补肾填精法对早期POI患者月经改善的效果更佳。(3)观察发现,POI患者临床全身症状主要表现为失眠、抑郁不乐,其中C组、D组患者还表现为烘热汗出、身倦疲乏、性欲低下等,经补肾填精法治疗后,各主要症状出现的频数均减少。(4)与治疗前相比,经补肾填精法治疗,POI患者血清AMH水平均升高,其中A、B、D三组升高明显,且A组中药效果更佳；血清FSH水平均有所下降,其中B、C、D三组下降更明显。(5)小鼠ZP3溶液注射可成功建立免疫型POI动物模型,表现为小鼠动情周期紊乱,阴道脱落细胞涂片以白细胞为主,时见少量上皮细胞。左归丸治疗后,小鼠动情周期尚规律,以动情期为主,阴道细胞涂片表现为大量的角化上皮细胞。HE染色结果显示,模型组小鼠卵巢生长卵泡比率降低明显(P<0.01),经左归丸灌胃后,小鼠的卵泡生长比率升高,差异有统计学意义(P<O.05)。(6)观察发现,随鼠龄增加,小鼠血清AMH水平下降,FSH水平上升。与模型组相比,左归丸组小鼠血清AMH水平明显升高,且优于补佳乐组(P<0.05),FSH水平显著下降,与补佳乐组比较,无明显差异。(7)免疫组化法与Western blot法结果显示,AMH、ALK2、Smad,蛋白均在卵泡颗粒细胞胞浆表达。老年鼠卵巢AMH、ALK2、Smad,蛋白表达明显低于空白组。与模型组比较,补佳乐组、左归丸组小鼠的卵巢AMH、Smad,蛋白表达均升高(其中Western blot法检测显示,左归丸组优于补佳乐组),ALK2蛋白表达亦升高(Western blot法检测显示补佳乐组优于左归丸组)。结论：1.补肾填精法可改善POI患者月经及全身症状,能降低患者血清FSH水平,上调AMH水平,并可干预POI的进展。2.卵巢中AMH蛋白表达的降低可能是导致POI发生的因素之一,并可能通过影响AMH/ALK2/Smad,信号转导,影响原始卵泡的募集,从而使卵泡消耗过快。3.补肾填精方左归丸可上调POI小鼠卵巢AMH蛋白的表达,可能通过影响AMH/ALK2/Smad,信号转导,抑制卵泡的过快募集和消耗,改善卵巢功能。