鸡球虫卵囊收集生产工艺的优化

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:harryxu200x
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为了优化鸡球虫卵囊生产工艺,获得球虫疫苗生产中高回收率、低成本、快速的球虫卵囊生产方法。本文通过限制卵囊排放期饲料供给试验,摇床和玻璃珠破碎含卵囊粪样试验,氢氧化钠助溶除渣试验,漂浮液的种类、用量及液面高度优化试验比较卵囊的回收率、纯度及成本,用不同培养条件及培养液深度比较卵囊成熟的速度与获得成熟卵囊的数目。试验结果发现:(1)鸡排球虫卵囊期,控料2d-3d组日均粪重显著低于(P<0.05)不控料对照组和控料1d组。控料1-3d的试验组鸡日均卵囊产量、卵囊收量与不控料对照组差异不显著(P>0.05),控料3d组卵囊收率显著高于(P<0.05)不控料对照组,控料1d和2d组与不控料对照组卵囊收率差异不显著(P>0.05)。(2)粪样破碎正交试验发现,滤液中释放卵囊的影响因素由大到小依次为:玻璃珠粒径>搅拌转速>玻璃珠重量>搅拌时长;滤液中固形物质数量的影响因素由大到小依次为:搅拌转速>玻璃珠重量>搅拌时长=玻璃珠粒径。最优搅拌条件为振幅2mm、搅拌转速215r/min、搅拌时间20min、粪样重量0.4倍的9mm玻璃珠,释放卵囊量显著高于(P<0.05)原程序玻璃棒搅拌1h组,固形物质量显著低于(P<0.05)原程序组。(3)饱和盐水漂浮离心后沉淀中卵囊被细颗粒杂质粘连或包裹成团。使用0.5%氢氧化钠浸泡处理3-9min的卵囊粪样粗提物,饱和盐水漂浮率显著高于(P<0.05)不处理对照组和高浓度氢氧化钠组。氢氧化钠浓度≥3%组的饱和盐水漂浮率显著低于(P<0.05)对照组。0.5%氢氧化钠处理3min、6min和9min组饱和盐水漂浮率差异不显著(P>0.05)。氢氧化钠浓度≥3%处理组,随氢氧化钠浓度增高和处理时间延长,漂浮液中卵囊减少,漂浮率降低。(4)2倍-8倍沉淀体积的饱和盐水漂浮效果随饱和盐水体积增大漂浮率增高,4倍和6倍沉淀体积的饱和盐水漂浮率最高,且二者差异不显著(P>0.05),当使用大于6倍沉淀体积饱和盐水时,漂浮效果显著下降(P<0.05);饱和盐水液体深度在2-6cm时,随着液体深度的增加,卵囊的漂浮率增高,液面高度≥4cm,漂浮率达到90%。(5)培养时间相同时,通气培养组孢子化率显著高于(P>0.05)静置培养组及震荡培养组,震荡培养孢子化率显著高于静置培养组(P>0.05)。震荡培养获得的孢子化卵囊比通气培养多26.73%,比静置培养多214.71%。球虫卵囊浓度为4×10~5个/m L,培养液深度0.5-7.5cm时,液面越浅,孢子化速度越快,28℃静置培养时间48h,各组均能达到基本成熟(≥85%),但液深0.5cm组卵囊孢子化率显著大于(P<0.05)液深≥3.6cm组。(6)球虫卵囊收集优化组的用水量、用时和成本显著低于原程序组(P<0.05),在处理同量含卵囊粪样用水量减少了33.89%,用时减少了17.20%,卵囊收集成本降低49.13%。表明在潜隐期开始控料,不会降低卵囊的产量,但能提高卵囊收率,在减少粪量节约用水量的同时也降低了饲料的费用;含卵囊粪样使用4倍体积的卵囊分离液,摇床振幅2mm、转速215r/min、时长20min、粪样重量2/5的9mm玻璃珠破碎,在漂浮前使用0.5%氢氧化钠洗涤卵囊,使用沉淀体积4倍的饱和盐水、液深4cm以上漂浮卵囊,能使卵囊收率提高12%,用水量减少33.89%,用时减少17.2%,卵囊收集成本降低49.13%,从而达到高回收率,低成本,快速大量收集球虫卵囊的效果。
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