雷竹PvCO基因克隆和功能分析

来源 :浙江农林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:LQL12
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拟南芥CONSTANS(CO)是光周期途径中控制开花时间的关键基因,CO突变体在长日照条件下花期延迟,短日照对其花期没有影响。过表达CO基因的拟南芥在长日照及短日照条件下花期均可提前。本文以雷竹(Phyllostachys violascens)为材料进行了CO克隆及功能分析,主要结果如下:1、本文获得了两个雷竹CO基因,分别命名为PvCO1和PvCO2。氨基酸序列分析发现PvCO1和PvCO2靠近N端都含有两个保守的类锌指B-box结构域,靠近C端保守的CCT结构域。PvCO1和PvCO2基因结构为两个外显子和一个内含子,PvCO1和PvCO2在氨基酸序列水平上的相似性为70.91%。2、通过RT-PCR检测了PvCO1和PvCO2基因的时空表达特性,PvCO1基因表达具有昼夜节律性,而PvCO2未表现出昼夜节律;组织特异性检测发现,PvCO1基因在茎、幼叶、老叶和花都检测到了表达,花芽检测到了低量表达,但是在根中没有检测到表达。PvCO2基因只在幼叶和老叶检测到了表达,而在根、茎和花芽中没有检测到。 PvCO1基因在开花前表达量低,持续开花中的表达量较高,而开花后期表达量又较低,PvCO2基因在开花前后的表达量几乎没有什么变化。3、酵母双杂交实验验证了雷竹PvCO1蛋白会与雷竹14-3-3(PvGF14C)蛋白互作,且发现B-box保守结构域是PvCO1和PvGF14C蛋白的互作位点。4、亚细胞定位实验结果表明,PvCO1和PvCO2都定位于细胞核中, PvCO1的核定位信号存在CCT结构域,CCT结构域是起核定位信号作用。5、构建PvCO1和PvCO2过表达载体侵染野生型拟南芥,转PvCO1基因的拟南芥T2代延迟开花,而转PvCO2基因拟南芥T2代花期与野生型相似。
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