癫痫是神经系统常见的慢性疾病之一,约1/4为药物难治性癫痫,其中70%为颞叶癫痫。我们前期研究发现通过制备大鼠颞叶癫痫(Temporal lobe epilepsy,TLE)模型,发现海马神经元损伤,运用蛋白质组学技术将TLE大鼠海马组织与正常对照组及手术组进行比较,鉴定出一系列差异表达蛋白质,其中脑衰反应调节蛋白(Collapsion response mediator protein,CRMP-2)为下调最显著的蛋白质,提示其与TLE的发病密切相关。CRMP-2是CRMP家族5中亚型之一,主要表达于成人大脑的高度可塑性区域,如海马、嗅球和小脑。CRMP-2有促进轴突生长的作用,而磷酸化的CRMP-2失去促进轴突生长的作用。颞叶癫痫海马神经元损伤或抗损伤的过程中可能是通过CRMP-2及其磷酸化调控实现的。目的:观察CRMP-2在海人酸(KA)点燃癫痫大鼠模型中的海马的时空表达变化及其磷酸化调节,并探讨CRMP-2在颞叶癫痫海马神经元损伤或抗损伤过程中是通过其磷酸化作用调节实现的。方法:选取雄性Wistar大鼠64只,体重250-300g,采用海马杏仁核注射海人酸制备大鼠癫痫模型,将大鼠分为正常对照组(CONT)、假手术组(SHAM)、海人酸致痫组。通过Western Blot、免疫组织化学染色,检测致痫后不同时间点(3h、6h、24h、3d、7d、14d)癫痫大鼠海马CRMP-2及其磷酸化后的表达变化,并通过HE染色方法观察其病理变化结果:(1)HE染色观察致痫后海马的病理变化,CONT组和SHAM组的大鼠可见海马区锥体细胞及齿状回颗粒细胞形态正常,排列整齐,结构完整。与KA组相比,海马CA3区神经元细胞损伤最严重。KA致痫大鼠病理改变早期(3h)以神经元变性为主,可见细胞间质水肿。随后(6h)主要病理学改变是神经元坏死。随着病程进展,(24h、3d)海马神经元细胞发生明显的丢失或死亡,海马CA3区大片状坏死,多数细胞完全脱落消失,部分细胞收缩,核固缩、破碎、溶解,核仁消失,可见胶质细胞增生和毛细血管增多改变。最后(7d、14d)病情进一步加重,可见明显的神经元脱失,残存的神经元排列紊乱,细胞层基本消失,区域界限模糊,不同程度的胶质细胞增生。(2)Western Blot法检测KA致痫后大鼠的海马CRMP-2表达在3h、6h、24h、3d、7d、14d时间的变化是先升高后逐渐降低的,KA致痫后3h大鼠的海马CRMP-2的表达量迅速增多达高峰,但第14d略高于第7d。KA致痫后3h、6h、3d、7d、14d的CRMP-2的表达量与SHAM组相比较,有显著性差异(P<0.05)。(3)Western Blot法检测KA致痫后大鼠的海马p CRMP-2表达在3h、6h、24h、3d、7d、14d时间的变化是先降低后逐渐升高的,海人酸致痫后大鼠海马p CRMP-2表达水平3h开始下降,6h达最低,随后逐渐升高。KA致痫后各时间点的p CRMP-2的表达量与SHAM组相比较,均有显著性差异(P<0.05)。(4)免疫组织化学染色方法观察海马CA3、CA1、DG各区在假手术组、致痫后3h、6h、24h、3d、7d、14d的CRMP-2及p CRMP-2的表达,KA致痫后大鼠的海马CRMP-2表达在3h、6h、24h、3d、7d时间的变化为先升高后降低的趋势,但第14d较第7d是升高的。KA致痫后各时间点的CRMP-2的表达量与SHAM组相比较,有显著性差异(P<0.05)。在海人酸致痫后3h、6h、24h、3d大鼠海马CA3区p CRMP-2表达的变化为降低的趋势,7d、14d略微升高。KA致痫后各时间点的p CRMP-2的表达量与SHAM组相比较,均有显著性差异(P<0.05)。KA致痫后大鼠海马CA1、DG区CRMP-2及其p CRMP-2的表达在各时间点未见明显变化趋势。结论:(1)在癫痫组大鼠海马神经元损伤以CA3区为主,CA1、DG区细胞形态完整,排列整齐。因此,CA3区最容易出现神经元过度兴奋而致神经元死亡。(2)海人酸致痫后CRMP-2在大鼠海马组织表达变化为先升高后逐渐降低的趋势,而p CRMP-2(Thr514)是先降低后升高的趋势。(3)海人酸致痫后大鼠海马CRMP-2及其磷酸化蛋白表达水平存在时空表达差异,CRMP-2及其磷酸化可能参与了癫痫后神经元轴突生长的调节,在癫痫过程中可能与神经元损伤密切相关。