猪流感是猪较为常见的呼吸道疾病,会引发咳嗽、打喷嚏、流鼻涕、发热和呼吸困难等症状。猪流感不但给养猪业带来巨大的损失,同时也严重威胁人类的健康,因此具有重要的公共卫生学意义。本研究从某发病猪场分离到一株H1N1亚型猪流感病毒,进一步分析显示,此病毒属于欧亚类禽猪流感病毒。利用RT-PCR技术,分别扩增到8个基因片段,克隆到流感病毒反向遗传系统载体上,将8个质粒共转染293T细胞,成功拯救了一株猪流感病毒。经测序显示,拯救得到猪流感病毒与亲本毒序列完全一致。比对序列发现,PB2基因存在两个启动子,多编码一个长度为71个氨基酸的蛋白,命名为PB2-X。通过定点突变的方法突变掉PB2基因多余的启动子(ATG-ATT),拯救出一株不表达PB2-X的突变毒株。通过分别在MDCK细胞与ST细胞上比较两株病毒的生长特性,结果显示两株病毒在ST细胞中复制能力均较强。通过生长曲线测定、聚合酶活性试验等试验证明了不表达PB2-X蛋白的突变毒株的复制能力优于原毒株。说明PB2-X蛋白的存在影响了病毒的体外复制能力。通过小鼠攻毒试验比较两株病毒的致病力,结果显示两组接毒小鼠的体重没有明显的降低,说明分离的欧亚类禽H1N1猪流感病毒对小鼠的致病性较弱,PB2-X对其致病性影响较小。本研究建立的欧亚类禽猪流感病毒反向遗传系统为研究其复制与致病机制奠定基础,并首次发现此欧亚类禽H1N1猪流感病毒PB2基因表达一个新的PB2-X蛋白。