丹参CYC类(两侧对称性)基因的分离和表达分析研究

来源 :曲阜师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:QINSHAOKUN1988
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两侧对称花是被子植物进化过程中的重大事件。在广义唇形目中,前人研究表明两侧对称花的形成与CYC类基因的表达调控密切相关,如苦苣苔科和金鱼草属等一些基部类群。那么在进化程度更高的类群,如唇形科,其两侧对称花的形成是否也受CYC类基因的表达调控呢?因此我们选择唇形科的丹参为研究对象探讨其两侧对称花形成的分子机制。丹参属于唇形科鼠尾草属,具有典型的两侧对称花,背部花瓣和侧部花瓣自身呈不对称性,背部雄蕊消失,侧部雄蕊退化,腹部杠杆雄蕊有2个不育药室。那么,丹参两侧对称花的形态建成是否与CYC类基因的调控有关?丹参CYC类基因的拷贝数有多少?这些基因是怎样进行表达调控的?CYC类基因具抑制器官发育的功能,那么丹参杠杆雄蕊药室的败育是否与CYC类基因的表达调控有关?为解决上述问题,本论文通过电镜观察花发育的过程、分离CYC类基因再进行序列分析和系统发育分析,然后对CYC类基因进行半定量RT-PCR及荧光定量RT-PCR的表达进行研究。结果如下:第一,我们观察了丹参的花发育过程。在花原基发育时期,各轮花器官就出现了背腹不对称的发育模式,其中背部雄蕊在该时期就已经消失。第二,我们分离得到了4个拷贝的CYC类基因,经系统发育分析表明Sm CYC2A和Sm CYC2B聚到了ECE(CYC/TB1)亚支中的CYC2类基因,另外两个拷贝Sm CYC3a和Sm CYC3b聚到了CYC3类基因中,这是首次在丹参中分离到CYC3类基因,序列分析表明了同类基因的同源性更高,不同类的基因之间的分化较大。同时我们还分离到一个RAD基因的同源序列和一个DIV基因的同源序列,通过序列比对和系统发育分析分别将其命名为Sm RL基因和Sm DIV基因。第三,基因表达结果分析表明,丹参的两个CYC2类基因Sm CYC2A和Sm CYC2B在背部花瓣从早期到中期持续地表达,这说明他们参与了丹参两侧对称花背部形态的发育调控;在早期的侧部退化雄蕊中检测到了Sm CYC2B的表达,但在后期表达逐渐减弱。丹参CYC3类基因中的Sm CYC3b在背部花瓣中有表达,但是相较于CYC2类基因,表达量要低,这说明该基因可能也参与调控,但是所起到的作用可能不是主要的。然而,丹参杠杆雄蕊的不育药室检测不到这4个拷贝基因的表达,这说明腹部的不育药室与这4个拷贝基因没有直接的调控关系。综上结果,丹参的两个CYC2类基因都参与了两侧对称花的调控,丹参CYC3类基因Sm CYC3b首次被发现在唇形科的花背部进行表达。
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