RNA干扰hARD1对大肠癌细胞株增殖影响的研究

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目的:研究hARD1变化对大肠癌细胞系的生长、增殖的影响,为hARD1作为人大肠癌的肿瘤标记物及临床诊疗探索理论依据。方法:以三株人大肠腺癌细胞株SW620、HCT-8和LS-174T为研究对象,用筛选出的有效沉默hARD1的siRNA转染上述人大肠腺癌细胞株,以EdU法研究分析hARD1变化对大肠癌细胞系生物学行为的影响。步骤:1. HCT-8、SW620和LS-174T细胞的培养;2. siRNA的设计合成;3. siRNA转染LS-174T、SW620和HCT-8细胞:4.细胞总RNA的抽提和质检;5.用RT-PCR、Western Blot法检测转染效果;6.利用EdU法检测细胞增殖情况;结果:1. HCT-8、SW620和LS-174-T细胞体外培养成功且生长状态良好;2.siRNA转染效果良好,由siRNA-ARD1干扰的三株人大肠腺癌细胞,成功建立瞬时转染细胞系;3.各组细胞总RNA样本质检结果均为28S/18S>0.7,为合格样本;4.以β-actin和GAPDH为内参进行siRNA有效性分析,两者的数据分析结果基本一致;5.三株细胞转染后24h、48h、72h,用EdU+Hoechst双染法检测细胞增殖改变,提示转染组细胞增殖比例均低于阴性对照组和空白对照组。结论:1.由siRNA-ARD1干扰的三株人大肠腺癌细胞,可实现hARD1在细胞株中的低表达;2. siRNA干扰lARD1,后,三株人大肠腺癌细胞的增殖受到抑制,推测1ARD1可作为临床治疗的靶点之一;3. LipofectamineTM RNAiMAX脂质体会影响细胞株的增殖,并参与细胞的诸多生理活动。
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