【摘 要】
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通过屡冷冻,差速离心及蔗糖密度离心等步骤,从广州地区香蕉束顶病感染植株中提纯直径25nm的病毒颗粒(BBTV),ELISA检测结果,此提纯病毒制品与中科院华南植物研究所 提供的BBTV
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通过屡冷冻,差速离心及蔗糖密度离心等步骤,从广州地区香蕉束顶病感染植株中提纯直径25nm的病毒颗粒(BBTV),ELISA检测结果,此提纯病毒制品与中科院华南植物研究所 提供的BBTV-单克隆抗体反应呈阳性,核酸分析表明,广州BBTV核酸可被DNase和S1核酸酶 降解,表明它属ssDNA.以广州(BBTV)优势株系的DNA为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增 得到病毒复制酶基因的1.1kb DNA.将此DNA连接到载体pGEM-T的SmaI位点,转化大肠杆菌(Escherichia coli)的DH5a菌株,采用EcoRI酶切,PCR,电泳方法鉴定重组质粒,用双脱氧终止法对BBTV复制酶基因进行了全序列分析,结果表明其全长为1116碱基,与澳大利亚BBTV株系比较,复制酶基因序列的同源率为90%.将改造的BBTV-L复制酶基因DNA克隆插入中间载 体pBI121的CaMV35S和NOS终止序列之间构成BBTV-L复制酶基因的植物表达载体,玻吧用基因枪轰击转化香蕉试管苗生长点的分生细胞组织,在含卡那霉素的选择培养上诱导长要和萌发成苗,对可能的转基因香蕉植株进行BBTV复制酶基因表达的PCR和Western blot分析,结果 测到有BBTV-L复制酶基因表达.攻毒试验表明:转基因香蕉有较强抗束顶病特性及延缓发病.研究香蕉束顶病原感健康蕉苗对香蕉束顶病的抗病性,发现香蕉束顶病原可通过香蕉交脉蚜、伤口接触、土壤三种途径感染健康蕉苗,以过多糖处理的蕉苗对香蕉束顶病具较强抗性,而用中药路边菊、田基黄,半边莲等处理的蕉苗对香蕉束顶病强抗性,和睡边菊、田基黄,半边莲等处理蕉苗抗性较弱.从野生资源中成功筛选到了抗香蕉束顶病毒的植株,对带BBTV的蚜虫感染试验的植株DNA为模板进行了PCR试验,结果表明,对照组有BBTV的扩增产物.而抗病试验组未能扩增出BBTV产物,初步的RAPD实验结果表明,抗病档与感病株有明显的差别.抗性一蕉苗在广东省海丰县进行大田验证试验,结果具有抗香蕉束顶病效果.
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