目的:鉴定人胰腺癌Panc-1细胞ezrin基因转录调控区,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除ezrin启动子,检测启动子敲除对Panc-1细胞的ezrin基因表达、细胞增殖和迁移的影响。方法:将携带ezrin基因上游片段的报告基因表达载体瞬时转染胰腺癌细胞Panc-1,采用双荧光素酶报告基因检测系统,鉴定ezrin转录调控区。使用在线软件预测ezrin转录调控区的启动子上下游g RNA靶位点,构建基因编辑重组质粒p X458-PL和p X459-PR。将重组质粒以不同的组合方式共转染Panc-1细胞,加入嘌呤霉素初步筛选,针对待敲除序列进行基因组DNA的PCR扩增和亚克隆测序分析,鉴定Panc-1细胞ezrin启动子的靶向敲除。采用RT-q PCR、Western blotting、细胞增殖和划痕实验分别检测靶向敲除启动子的胰腺癌细胞的ezrin基因m RNA和蛋白的表达情况、细胞增殖和迁移能力的变化。结果:荧光素酶报告基因检测结果显示,ezrin基因上游–87/+134片段具有转录激活作用,–1541/–706片段具有转录激活和增强双重作用。测序结果显示,成功构建了靶向ezrin启动子的基因编辑重组质粒。重组质粒共转染至Panc-1细胞,得到ezrin启动子敲除的胰腺癌细胞Panc-1-epd。与未转染基因编辑重组质粒的对照细胞Panc-1相比,敲除启动子的Panc-1-epd细胞,其ezrin基因m RNA和Ezrin蛋白表达均显著下调,细胞增殖及迁移能力均显著受到抑制。结论:靶向敲除ezrin基因启动子的人胰腺癌细胞ezrin基因表达下调,细胞增殖与迁移能力受到抑制。