人HCC侵袭、复发相关分子的蛋白质组学研究及S100A9蛋白的表达验证

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:Ericchn
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目的:应用比较蛋白质组学策略,对有侵袭、复发的人HCC组织标本的蛋白质表达谱中差异蛋白质点进行比较分析,筛查与HCC侵袭、复发相关的蛋白质分子,初步探讨其临床应用价值。 材料和方法:选择经临床和病理证实有侵袭和复发的人HCC组织标本(以无侵袭、复发的HCC为相应对照)各5例,提取肝癌组织总蛋白,应用IPG胶条(pH3~10NL,13cm)的和12.5%的SDS-PAGE进行双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离蛋白,用Image Master扫描及分析软件对相应比较组的全蛋白质表达谱进行差异点分析,胶内酶解差异点所得的肽段应用基质辅助的激光解吸离子化—飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,数据送入NCBI非冗余数据库,通过MASCOT搜索引擎检索、鉴定出相应蛋白质。并应用免疫组织化学、Western blot分析、RT-PCR等技术对分别筛选出的S100A9蛋白在组织学水平、蛋白质水平和mRNA水平进行了表达验证。扩展免疫组化检测S100A9在正常肝组织、乙肝后肝硬化组织和不同表型肝癌组织标本中的表达,联系临床病理资料,初步探讨其临床应用价值。 结果:在相同条件下,侵袭组(Ⅰ组)平均检测到1079±56(n=3)个蛋白点,非侵袭组(NI组)为1058±73(n=3)个。以其中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶,进行2组间的匹配分析,筛选出差异2倍及以上且出现频率大于等于50%的蛋白点31个。其中1235号点在NI、Ⅰ组织中的表达存在显著差异,胶内校正后的灰度平均值比较Ⅰ是NI的13.3倍。结果鉴定出S100A9、S100A8、HSP27、Prx2、Annexin Ⅳ等22
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