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背景和目的：成神经细胞瘤是儿科常见的恶性肿瘤之一,目前对于这种疾病的治疗,整体疗效较差。而且随着耐药性的出现,其复发率相当高,因而对成神经细胞瘤治疗方法的探索及其耐药性的消除,早已引起了研究人员的高度关注近年来,通过对肿瘤细胞凋亡程序的调控来达到治疗目的的方法越来越多的出现,并有望成为极具潜力的治疗手段。同时研究发现：仅给予一种药物治疗,其效果往往有限,且容易出现耐药性。因而,将不同作用机制的药物联合应用以更好的发挥疗效,已成为人们研究的热点。二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)是大蒜中分离提取的单体有机硫化物,可通过多种方式抑制肿瘤细胞的生长、诱导细胞凋亡以及细胞周期阻滞等,其重要的机制之一就是可以诱导细胞产生活性氧(reactive oxygen species, ROS),激增的ROS可激活JNK/c-Jun信号通路,然后通过经典的线粒体途径引起细胞凋亡。Bortezomib(硼替佐米)是一种二肽硼酸,作为蛋白酶体抑制剂,能够可逆地、选择性地抑制蛋白酶体,而蛋白酶体可以泛素化后降解相应蛋白底物,进而调节细胞内的众多生理过程,如细胞周期、细胞凋亡、信号传导等。其中Bortezomib可以通过抑制NF-κB的活性引起ROS的升高,这是它发挥治疗功效的重要途径之一。而NF-κB是一种非常重要的转录因子,在细胞受外部信号刺激时可发生核转位,调节众多的基因表达,具有很强的抗氧化和抗凋亡的作用。简言之,DADS可诱导细胞产生ROS进而激活JNK/c-Jun信号通路,另一方面,Bortezomib抑制NF-κB的激活,间接升高ROS水平,因此,我们将DADS和Bortezomib联合应用,从而达到增强药效的目的。方法：不同浓度的DADS、Bortezomib单药及联合用药处理SH-SY5Y细胞24h,MTT法测定DADS、Bortezomib单药及联合用药对SH-SY5Y细胞增殖活性的影响；Hoechst33258染色和流式细胞术检测DADS、Bortezomib单药及联合用药对SH-SY5Y细胞凋亡的诱导作用；流式细胞术测定DADS、Bortezomib单药及联合用药对细胞ROS产生的影响。结果：①对SH-SY5Y细胞增殖的影响：100μmol/L DADS、10 nmol/L Bortezomib单药及联合用药作用24 h,结果显示DADS、Bortezomib单独用药对细胞的增殖具有抑制作用且呈浓度依赖性,而联合用药对细胞增殖的抑制作用比单独用药效果更好。②对SH-SY5Y细胞凋亡的诱导作用：100μmol/L DADS、10 nmol/L Bortezomib单药及联合用药作用24 h,Hoechst33528染色显示SH-SY5Y细胞的形态,我们发现SH-SY5Y细胞的凋亡特征：胞浆和细胞膜保持完整,但染色体固缩,呈典型的凋亡形态学改变,说明DADS与Bortezomib均能诱导细胞发生凋亡；流式细胞术检测也表明DADS与Bortezomib单独用药均能诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,与对照组凋亡率比较具有统计学意义(P<0.01)；联合用药组的凋亡率与单独用药组比较,凋亡率明显增加,具有统计学意义(P<0.01)。③对SH-SY5Y细胞ROS生成的影响：用DADS与Bortezomib单独处理SH-SY5Y细胞12 h,流式细胞仪检测显示DADS与Bortezomib单独用药均能使细胞内活性氧产生升高,与对照组比较,具有统计学意义(P<0.01)；联合用药组比单独用药组使SH-SY5Y细胞产生的活性氧量更多,结果具有统计学意义(P<0.01)。结论：Bortezomib可促进DADS诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,ROS的产量增加可能在其中发挥了重要作用。