血清microRNA-217在特发性膜性肾病中表达与中医证型分布的研究

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目的:特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)是一种自身免疫性肾病。至今为止,病理肾穿刺活检是该病诊断的金标准。M型磷酯酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)被证实在IMN的肾小球足细胞中表达,受到广泛关注。本研究利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测IMN患者中血清micro RNA-217(mi RNA-217)的表达水平,分析IMN患者mi RNA-217含量变化,并研究mi RNA-217与IMN患者中医证型之间的关系、mi RNA-217与抗PLA2R抗体的相关性分析,探索新型的IMN的血清学标记物。材料与方法:1.选择辽宁中医药大学附属医院自2018年7月至2019年9月患者共153例,其中经皮穿刺肾活检确诊为IMN患者48例、非IMN其他肾病患者44例及健康对照组43例,检测全部研究对象的血清肌酐(Cr)、尿素氮(Bun)、尿酸(UA)、血清胱抑素C(Cys C)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、前白蛋白(PA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、估算肾小球滤过率(e GFR)、白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)、尿微量白蛋白(m ALB)、24小时尿蛋白定量(24 h UTP)、血清抗PLA2R抗体及全部患者的病理结果。2.应用q RT-PCR技术检测IMN组、非IMN组与健康对照组血清mi RNA-217的表达水平,用2-△△CT法进行mi RNA相对表达量的计算;3.由专业医师按照诊断标准,对IMN组与非IMN其他肾病组患者患者进行症候的收集,判断患者的中医证型;4.应用SPSS 17.0对全部数据进行统计学分析。结果:1.IMN组UA、TG、TC、LDL-C、ALB、TP、Cys C、m ALB、24h UTP高于正常对照组(P<0.05);IMN组TG、TC、LDL-C、TP、ALB、m ALB、24h UTP、估算e GFR高于非IMN组(P<0.05);IMN组Bun、Cr、GLU低于非IMN组(P<0.05);非IMN组Bun、Cr、UA、TG、TC、Cys C、m ALB、24h UTP、GLU高于正常对照组(P<0.05);非IMN组估算e GFR低于正常对照组(P<0.05)。2.在中医证型本虚证方面,IMN本虚证证型构成比从高至低分别是脾肾气虚证25例(52.08%)、气阴两虚证9例(18.75%)、脾肾阳虚证6例(12.50%)、肺肾气虚证4例(8.33%)、肝肾阴虚证4例(8.33%);非IMN组共44例,本虚证证型构成比从高至低为气阴两虚证15例(34.09%)、脾肾气虚证14例(31.82%)、脾肾阳虚证6例(13.64%)、肺肾气虚证5例(11.36%)、肝肾阴虚证4证(9.09%)。两组本虚证构成比不同,差异有统计学意义(P<0.05);在标实证方面,证型构成比从高至低分别是血瘀证39例(81.25%)、水湿证33例(68.75%)、湿热证16例(33.33%)、湿浊证7例(14.58%);非IMN组共44例,本虚证证型构成比从高至低分别是血瘀证35例(79.55%)、水湿证28例(63.64%)、湿热证11例(25.00%)、湿浊证10例(22.73%)。两组标实证的构成比不同,差异无统计学意义(P>0.05)。3.应用q RT-PCR方法对目的基因mi RNA-217与内参基因hsa-mi R-16进行检测,用2-△△CT法进行mi RNA相对表达量。IMN组与非IMN肾病组相对于对照组的倍数分别为0.15与2.22;其中INM组患者mi RNA-217相对表达量显著低于对照组(P<0.05),非IMN肾病组mi RNA-217相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。m i RNA-217 ROC曲线下面积(AUC)为0.936,敏感度为81.2%,特异性为79.4%。mi RNA-217的相对表达量与抗PLA2R抗体的量成负相关(r=-0.841,P<0.01)。4.IMN组mi RNA-217与病理情况分析,mi RNA-217在Ⅰ期患者中表达相对较Ⅱ、Ⅲ期高,肾脏组织中Ig G阳性占93.75%,mi RNA-217的相对表达量在Ig G阳性患者中较低,肾脏组织中抗PLA2R抗体的阳性率为83.33%,mi RNA-217的相对表达量在抗PLA2R抗体阳性患者中较低;在电镜检测方面,mi RNA-217的相对表达量在有电子致密物沉积的患者中较低。5.IMN组中医证型本虚证与mi RNA-217分析,脾肾气虚患者mi RNA-217相对表达量高于其他证别,与脾肾阳虚证、肝肾阴虚证、气阴两虚证相比差异有显著性(P<0.05);气阴两虚证患者mi RNA-217相对表达量最低,与脾肾气虚证、肺肾气虚证患者相比差异有显著性(P<0.05);脾肾气虚证与肝肾阴虚证患者mi RNA-217相对表达量低于脾肾气虚证与肺肾气虚证,差异有显著性(P<0.05)。结论:1.IMN患者血清mi RNA-217表达下调,血清mi RNA-217可能是IMN诊断的良好标志物;血清mi RNA-217在病理情况较重的IMN患者中有更低表达。2.IMN患者的中医证型存在分布差异,本虚证以脾肾气虚证较高,标实证以血瘀证较高;3.血清mi RNA-217的表达在脾肾气虚证中较高,在气阴两虚证中较低。4.血清mi RNA-217与血清抗PLA2R抗体呈负相关。
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