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目的: 人olfactomedin4(OLFM4)基因又称抗凋亡分子GW112,在胃癌中特异性高表达,并且在胃癌细胞的增殖和调控中起着非常重要的作用。真核生物mRNA大多数的调控元件都位于非翻译序列中,这些调控元件能够通过与特定RNA结合蛋白作用来进行基因表达调控。所以本次研究目的是通过体外试验筛选出与GW112 mRNA3非翻译区(3UTR)特异性结合蛋白,并研究蛋白性质。 方法: 以稳定表达GW112基因的胃癌细胞SGC-7901为实验对象,体外转录法获得GW112 mRNA3非翻译区片段并用生物素标记,结合亲和素磁珠特异性吸附原理,从细胞总蛋白中纯化出与GW112 mRNA3非翻译区特异性结合蛋白。经过质谱鉴定得到目标条带蛋白信息,并用蛋白印迹(Western blot)验证结果。 结果: 成功获得含GW112基因3非翻译区RNA片段,经化学发光法检测后,生物素标记效率高。磁珠纯化的RNA蛋白样品经PAGE电泳银染后,电泳蛋白条带清晰。取目的条带进行质谱分析发现存在核仁素蛋白,以核仁素单克隆抗体进行蛋白印迹(Western blot)验证后发现与质谱结果一致。 结论: 核仁素是GW112 mRNA3非翻译区特异性结合蛋白的一种,并很可能对GW112 mRNA稳定性有直接影响,这为进一步揭示GW112在胃癌细胞抗凋亡机制中的作用奠定基础。