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实验目的:
本实验以角膜上皮细胞(HCECs)为模型细胞,细胞培养于纤维支架上进行电刺激,考察电刺激对细胞的影响。同时对细胞在纤维支架上的生长情况进行观察,是否影响细胞的存活,研究纤维支架在细胞培养中的应用,为其在以后的药物缓释、细胞载体、组织工程支架的研究中提供一定的帮助。
实验方法:
首先要制备出用于细胞培养的纤维支架。所用材料为聚氧化乙烯(PEO)和羟基石墨烯(G-OH)的混合物(其中PEO的浓度为8%,G-OH的浓度为1.0%),利用静电纺丝法制备出纤维支架。再把细胞培养于纤维支架上,由于支架中含有G-OH,其良好的电化学性能也使纤维支架有了一定程度的导电性能,这样便可通过电化学工作站给予外加电压,对培养于纤维支架上的细胞进行电刺激。之后对细胞进行观察,看细胞的生长情况是否受到电刺激的影响。通过FDA荧光染色和细胞固定后拍摄扫描电镜图表明细胞的生长情况。由此分析电刺激对生长于纤维支架上的细胞产生的影响。
实验结果:
1.静电纺丝法制备的纤维支架的表征结果:
1)纤维支架的扫描电镜图:从扫描电镜图中可以看出纤维密集交错、层层叠加,组成了较厚的纤维网。而且纤维的粗细均匀、表面平滑,纤维的直径在几百纳米左右,纤维之间无粘连融合的情况。
2)电化学结果:用电化学工作站测得的纤维支架的CV图中可以看出纤维支架能够导电,具有一定的电化学活性,为细胞培养于纤维支架上进行电刺激打下基础。
2.角膜上皮细胞(HCECs)电刺激结果:
1) FDA荧光染色结果:随着细胞培养时间的延长,经过电刺激实验组与对照组相比(B和F对比,C和G对比,D和H对比),实验组的细胞数目明显比对照组的变多,细胞增殖旺盛,细胞在纤维支架上贴壁良好,说明一定量的电刺激对细胞的生长还是有促进作用的,而且逐渐增加的电刺激次数并没有对细胞的生长产生明显的不良影响。
2)扫描电镜结果:从扫描电镜(SEM)结果中(图3-7)也可见,经过电刺激实验组与对照组相比(B和F对比,C和G对比,D和H对比),细胞经过电刺激以后生长旺盛,细胞形态正常,这与FDA染色的荧光结果是一致的,说明短时间低电压的电刺激能够促进细胞的生长。但由于我们所用材料的水溶性非常好,在细胞培养过程中出现了部分溶解,故纤维支架的稳定性还有待进一步提高。
实验结论:通过静电纺丝用PEO和G-OH混合液制备出纳米级的纤维支架,纤维走向平直,粗细均匀、表面平滑,而且具有一定的电化学活性。再对培养于纤维支架上的细胞进行电刺激,FDA染色和SEM的结果均表明电刺激能够促进细胞的生长,而且细胞形态正常,表明了电刺激对细胞的作用,也为纤维支架在细胞、组织工程方面的应用提供了可能性。