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目的猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2, PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）的一个主要病原，并与猪群中许多新发生的传染病密切相关。在临床上PCV2以仔猪呼吸急促困难、贫血、腹泻、明显的淋巴结病变、间质性肺炎和进行性消瘦为主要特征。当前，PCV2在世界各国猪群中普遍存在并广泛传播，可引起猪的免疫抑制、混合感染和继发感染，严重危害养猪业的发展。PCV2已经成为阻碍当今养猪业发展的重要病原之一。因此尽快揭开PCV2传染和致病的机理就显得相当迫切。本研究拟在利用软件分析PCV2ORF4的基础上，将ORF4分别克隆至原核和真核表达载体内，表达得到ORF4融合蛋白并用纯化的ORF4融合蛋白制备多克隆抗体，用抗体来检测PCV2ORF4基因在PK-15细胞中的表达情况。方法首先通过NCBI Blast发现PCV2ORF4序列在不同毒株间高度保守，设计引物并引入酶切位点，以分离自临床病料组织的细胞培养适应毒株（PCV2-SY）基因组为模板扩增出ORF4的序列。酶切回收后和经过相同酶双酶切的载体pGEX-4T-1连接构建重组表达载体pGEX-4T-ORF4；并以pGEX-4T-ORF4为模板扩增出GST-ORF4片段，双酶切GST-ORF4片段和真核表达载体pPIC9K，然后将其连接构建真核重组表达载体pPIC9K-GST-ORF4。以原核和真核表达载体表达的GST-ORF4蛋白为抗原分别免疫新西兰兔制备多克隆抗体。用制备的多克隆抗体对被PCV2感染后的不同时间的PK-15细胞进行Western blot鉴定和免疫荧光测定，明确PCV2ORF4的表达情况。结果（1）成功构建了原核重组表达载体pGEX-4T-ORF4和真核重组表达载体pPIC9K-GST-ORF4，并通过PCR和测序对重组质粒进行了鉴定，鉴定结果表明构建的重组质粒符合要求，基因序列没有发生突变。（2）在BL21细胞中成功表达了ORF4融合蛋白GST-ORF4，SDS-PAGE和Western blot检测结果表明目的蛋白得到表达。（3）将线性化的pPIC9K-GST-ORF4电转化进入GS115细胞后，用PCR法和MD、MM平板法对重组表型进行鉴定，鉴定结果表明获得的酵母重组子为Mut+表型，测序结果表明获得的重组子基因序列完全正确，没有突变。SDS-PAGE和Western blot鉴定结果表明酵母重组子在BMMY培养基中成功获得了表达。（4）将纯化后的蛋白免疫新西兰兔后成功获得了抗GST-ORF4的血清，通过Western blot对GST和GST-ORF4蛋白进行检测表明制备的抗体有效。（5）Western blot对感染PCV2后不同时间的PK-15细胞进行检测，结果显示为阴性，但用免疫荧光法对接毒后的PK-15细胞进行检测时发现ORF4蛋白在细胞内有少量的表达，证明ORF4基因可以在PK-15细胞中表达，为进一步研究其功能奠定了基础。